一氧化氮合酶在大鼠脑缺血再灌注损伤后时间—量变化及抑制剂对其作用的研究

• 作 者: 刘巍
• 机 构: 首都医科大学
• 出 处: 首都医科大学
• 发表日期: 2007年期
• 关键词: 一氧化氮合酶 脑缺血损伤 原生型酶 缺血再灌注

目的：　　
在各种缺血性脑损伤的动物模型中，一氧化氮合酶(NOS)在神经元细胞死亡中起着非常重要的作用。但在以前的相关文献报道中，局灶性缺血性脑损伤及再灌注过程中NOS作用仍然存在着争论。本实验的目的就是探讨研究在大鼠可逆性大脑中动脉栓塞模型(MCAO)中，在不同的再灌注时间点NOS各亚型酶的发生发展规律。根据NOS各亚型酶的发展规律，应用特异性抑制剂AG和7-NI，观察研究单独给抑制剂和联合给抑制剂的作用效果。　　
材料与方法：　　
(1)雄性SD大鼠分组后用异氟烷吸入性麻醉，MCAO90分钟后再灌注，进行神经功能评分。分别在再灌注1，2，6，9，12，24小时后，检测左、右侧大脑组织中NOS各亚型酶的活力(cNOS和iNOS)，SOD活力和MDA含量。取脑，切片，TTC染色，经图像分析仪分析脑梗死灶体积。(2)雄性SD大鼠分组后用异氟烷吸入性麻醉，MCAO90分钟后再灌注，进行神经功能评分。此时根据不同的分组分别给NOS特异性抑制剂AG、7-NI和联合应用两种抑制剂。在再灌注6、9、12小时后，检测左、右侧大脑组织中NOS各亚型酶的活力(cNOS和iNOS)，SOD活力和MDA含量。取脑，切片，TTC染色，经图像分析仪分析脑梗死灶体积。最后经SPSS统计分析数据。　　
结果：　　
(1)大脑中动脉栓塞导致了严重的脑缺血，再灌注激活了NOS的活性，使得cNOS和iNOS的活力在再灌注后的各个时间点都大幅度增加，至少持续到再灌注24小时。cNOS的高峰出现在再灌注后6小时，iNOS的高峰出现在再灌注后9小时。梗死灶体积的增加与NOS活力的增加呈平行状态。(2)应用抑制剂AG、7-NI和联合应用两种抑制剂后与未用抑制剂相比，都显著的降低了iNOS和cNOS在高峰时的表达活性，SOD活性明显升高，MDA含量显著降低。动物的行为功能评分明显降低，即缺血造成的左侧前肢的感觉缺失和运动障碍明显减轻。　　
结论：　　
(1)原生型酶(cNOS)包括eNOS和nNOS，在缺血再灌注早期被诱导表达，其活力在再灌注6小时后达到高峰。iNOS，在正常生理状态下很少表达，其高峰出现在缺血后再灌9小时。cNOS和iNOS在缺血性脑损伤再灌注阶段发挥着重要的作用。(2)单独应用抑制剂AG、7-NI和联合应用两种抑制剂都能有效的抑制NOS在高峰时的表达，从而减少了NO的生成，降低了NO的毒性作用，降低了脑缺血及再灌注对大脑的损伤。