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肝脏移植作为目前治疗终末期肝病的有效手段之一已经得到共识，但是排斥反应的发生一直是对移植肝功能能否长久维持的一个重要原因。因此免疫排斥一直是研究的热点。本实验拟在大鼠同种异体肝移植模型基础上，通过联合阻断CD28/B7和ICOS，探讨肝移植中排斥反应的机制，以及CTLA－4Ig，ICOS－Ig对移植肝功能的影响，能否阻断或减轻排斥反应，提高受体存活时间。
材料与方法
实验动物：供体采用SD大鼠，受体选用Wistar大鼠，供受体均为雄性，体重150～200g，由中国医科大学动物中心提供。
实验一：大鼠肝移植模型的制备：在Kamada二袖套法的基础上并做改进，成功建立了稳定的大鼠肝移植模型。
实验二：根据是否给予ICOS—Ig以及应用剂量的多少，分成4组，每组10只：
对照组：仅进行肝脏移植；实验1组：分别于肝脏移植术后第1、3、5天，腹腔内注射ICOS－Ig100μg/Kg；实验2组：分别于肝脏移植术后第1、3、5天，腹腔内注射ICOS—Ig200μg/Kg；实验3组：分别于肝脏移植术后第1、3、5天，腹腔内注射ICOS—Ig300μg/Kg。肝移植术后第1，3，5，7天取血检测血清ALT，TBIL；术后第7天切取移植肝脏HE染色观察组织形态学变化；免疫组化法观察ICAM-1表达情况；半定量Rt－PCR法检测肝组织IL－10，IL－2，ICOS基因表达水平；另外明确ICOS－Ig的最佳应用剂量。
实验三：随机分成3组，每组10只；ICOS－Ig组：分别于肝移植术后第
1、3、5天，腹腔内注射ICOS—Ig200μg/KG；CTLA4Ig组：分别于肝移植术后第1、3、5天，腹腔内注射CTLA4Igl50μg/Kg；联合阻断组：分别于肝脏移植术后第1、3、5天，腹腔内注射CTLA4-Igl50μg/Kg及ICOS—Ig200μg/Kg。肝移植术后第1，3，5，7，14，21，28天取尾静脉血测血清ALT，TBIL；术后第28天切取受者肝脏HE染色观察组织形态学变化；免疫组化法观察移植肝ICAM—l表达情况。半定量RT—PCR法检测肝组织IL-10，IL-2基因表达水平。 所用数据以均数±标准差表示，采取t检验。PO.05)。实验1组和对照组比较，受体大鼠存活时间有显著性差异(P<0.05)o肝移植术后第7天移植物内IL-2mRNA在实验2.3组呈现呈低表达，而在对照组及实验1组呈现高表达；IL-10mRNA呈高表达尤以实验2，3组为明显，在对照组和实验1组呈低表达。ICAM—l在对照组发生排斥反应时高表达o ICOS-Ig00μg/Kg为最佳剂量o
实验三：血清转氨酶变化：CTLA4Ig组，ICOS—Ig组受体大鼠均于移植后第3天接近正常。联合阻断组肝移植后血清转氨酶变化规律与前2组相似；总胆汁酸变化：CTLA4Ig组，ICOS-Ig组均于术后一周左右正常，但联合阻断组于术后第5天左右降至正常。联合阻断组ALTTBIL变化较前两组更明显且受体大鼠平均存活时间较前两组明显延长，为37.00±2.19d，存在显著差异(P<0.05)；而CTLA4Ig组和ICOS-Ig组比较，存活时间无明显差别(P>0.05)。对肝脏IL-10mRNA进行半定量RT-PCR分析可见，IL-10表达在联合阻断组明显处于高水平。IL-2在对照组表达为高水平，而其他三组均呈低表达，尤其以联合阻断组为明显。
1．大鼠肝移植模型的制备依据改进的“Kamada二袖套法”，效果良好，成功率在94％。
2．ICOS在大鼠同种异体肝移植发生排斥反应时表达上诃，ICOS-Ig可以通过阻断ICOS共刺激信号途径，诱导大鼠同种异体肝移植发生免疫耐受，减轻排斥反应，延长受体大鼠存活时间。大鼠ICOS-Ig抗排斥反应的最佳用药剂量为200ug/Kg。
3．联合阻断CD28/B7和ICOS，可明显抑制移植排斥反应，延长大鼠存活时间。
4．ICAM-1在移植肝发生急性排斥时高表达，随着排斥的减轻逐渐减少。IL-2，IL-10，ICAM-1可以作为监测排斥反应的有用指标。
5．B7/CD28共刺激信号途径和ICOS途径在移植排斥反应的发生中有协同作用，联合阻断二者可产生协同效应，较单一途径阻断效果明显。