论文部分内容阅读
【目的】： 1.探讨萝卜硫素对db/db小鼠认知功能影响。 2.探讨萝卜硫素对db/db小鼠海马区A D样病理改变的影响。 3.探讨萝卜硫素对db/db小鼠海马区N rf2通路及氧化应激反应的影响。 4.验证萝卜硫素是否可通过调节蛋白酶体改善慢性高糖诱导的Tau蛋白过磷酸化。 【方法】： 1. db/db小鼠随机分为糖尿病组、萝卜硫素组，db/+小鼠作为正常对照组。萝卜硫素组接受萝卜硫素（1m g/kg)腹腔注射，糖尿病组接受等量的生理盐水，连续给药28天。 2.采用M orris水迷宫实验评估小鼠认知功能。 3.采用WestemBlot、免疫组化检测小鼠海马区β样淀粉蛋白和过磷酸化Tau蛋白水平。 4.采用免疫荧光、激光共聚焦、Western B lo t评估小鼠海马区活性氧产物水平及N rf2通路改变。 5.以慢性高糖刺激体外培养的原代小鼠神经元，另给予其萝卜硫素或蛋白酶体抑制剂，观察过磷酸化T au蛋白的水平、蛋白酶体的活性和蛋白酶体的表达。 【结果】： 1. M orris水迷宫实验结果显示，在定位航行试验中糖尿病组小鼠逃避潜伏期较正常组组小鼠明显延长，萝卜硫素组小鼠逃避潜伏期较糖尿病组缩短（p<0.05)。空间探索试验中糖尿病组小鼠较正常组明显缩短了靶象限停留时间、减少了隐匿平台穿越次数，而萝卜硫素组较糖尿病组延长了靶象限停留时间、增加了隐匿平台穿越次数(p<0.05)。 2. Western Blot和免疫组化实验结果显示，与正常组相比，糖尿病组小鼠海马区AP斑块和寡聚体含量显著增加（p<0.05)，萝卜硫素组较糖尿病组明显减少（p<0.05)。 3.过磷酸化 Tau蛋白 p-Tau(Ser396)，p-Tau(Thr231),和AT8(Ser202/Thr205)的含量在糖尿病组明显髙于正常组（p<0.05); p-Tau(Ser396)和p-Tau(Thr231)含量在萝卜硫素组较糖尿病组下降（p<0.05)，但AT8(Ser202/Thr205)在两组间无统计学差异（p>0.05)。 4.与对照组相比，糖尿病组小鼠海马区呈现活性氧ROS/RNS水平增加，萝卜硫素缓解db/db小鼠海马区增加的ROS/RNS水平，上调db/db小鼠被抑制的N rf2信号通路（核内N rf2水平、HO-1、N Q01含量增加)。 5.慢性髙糖环境下神经元细胞内蛋白酶体活性下降，并且Tau蛋白过磷酸化水平增加；萝卜硫素可减轻慢性髙糖诱导的T au蛋白过磷酸化，同时上调了细胞内蛋白酶体的表达，增加了蛋白酶体活性。而加用MG132后SFN对Tau过磷酸化的保护作用失效。 【结论】： 萝卜硫素可以延缓db/db小鼠认知功能障碍，减轻2型糖尿病小鼠海马区发生A D脑病样病理损害，其保护效应可能通过上调N rf2介导的抗氧化应激防御系统。萝卜硫素可通过调控上调神经元细胞内蛋白酶体活性减轻慢性高糖诱导的Tau蛋白过磷酸化。