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背景胰腺癌是预后最差的恶性肿瘤之一,它具有恶性程度高、早期诊断困难的特点。80%的患者诊断时肿瘤已为进展期,失去了手术根治的机会。转移是制约胰腺癌远期生存的重要因素。因此明确胰腺癌转移的分子机制,对胰腺癌的治疗具有重要意义。本课题组前期研究发现泛素E3连接酶CHIP可以特异性结合并降解EGFR。在胰腺癌细胞中稳定过表达CHIP蛋白可以抑制EGFR的表达,降低其侵袭和迁移能力。在稳定抑制CHIP的胰腺癌细胞中EGFR的表达是升高的,侵袭和迁移能力也相应增强。CHIP可对胰腺癌细胞侵袭和迁移产生影响,但其对胰腺癌细胞上皮间质转化(EMT)是否具有调控作用仍不明确。因此我们将CHIP/EGFR信号通路作为本研究的研究对象,深入研究其对胰腺癌侵袭、迁移等恶性生物学行为的影响,验证CHIP是否能通过降解EGFR调控胰腺癌细胞EMT,并探索其调控机制。目的1.明确CHIP蛋白调控胰腺癌细胞株侵袭、迁移能力是否是通过EGFR信号通路;2.验证CHIP/EGFR能否介导胰腺癌细胞株上皮间质转化。3.初步探索CHIP/EGFR介导胰腺癌细胞株上皮间质转化的机制。方法本研究使用课题组前期构建的CHIP稳定过表达或抑制的PANC-1细胞株。通过脂质体瞬时转染法转染EGFR siRNA和EGFR过表达质粒改变细胞EGFR的表达,采用real-time PCR法和Western blot验证转染效果。成功转染后,采用划痕实验、Transwell小室实验检测改变EGFR表达情况后CHIP稳定转染细胞株的迁移和侵袭能力,明确CHIP是否通过调控EGFR对胰腺癌细胞株侵袭、迁移发挥调控作用。随后,通过Western blot法检测上皮间质转化标志物和EGFR相关信号通路,初步探索CHIP/EGFR信号通路介导胰腺癌细胞株上皮间质转化相关机制。结果1.在CHIP蛋白稳定抑制的胰腺癌细胞株PANC-1 amiRNA中,用siRNA干扰EGFR的表达,可以逆转EGFR过表达导致的侵袭、迁移能力增强;2.在CHIP蛋白稳定过表达的胰腺癌细胞株PANC-1 CHIPOE中,转染EGFR过表达质粒,可以逆转EGFR抑制导致的侵袭、迁移能力减弱;3.在PANC-1 amiRNA中,EGFR相对对照组高表达,EMT的标志物也发生变化,上皮表型标志物E-cadherin表达降低,间质表型标志物N-cadherin,Vimentin表达升高,Slug蛋白表达也升高;在PANC-1CHIPOE中可以得到相反的结果。4.实验的结果显示,在PANC-1amiRNA中,用siRNA干扰EGFR的表达,可抑制 EGFR 下游的 Src/FAK 信号通路,E-cadherin 表达升高,N-cadherin,Vientin表达降低,Slug蛋白表达也降低,逆转了 CHIP稳定抑制导致的上皮间质转化。在PANC-1 CHIPOE中过表达EGFR,激活了下游的Src/FAK信号通路,E-cadherin表达降低,N-cadherin,Vimentin表达升高,Slug蛋白表达也升高,发生了 EMT。结论1.CHIP蛋白通过EGFR调控胰腺癌细胞株PANC-1侵袭、迁移过程;2.CHIP/EGFR信号通路能介导胰腺癌细胞株PANC-1上皮间质转化;3.CHIP可通过降解EGFR抑制其下游的Src/FAK信号通路和Slug蛋白,调节胰腺癌细胞株PANC-1的上皮间质转化。