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曲霉菌病是人兽共患传染病,世界各国广泛流行。不仅对禽类造成感染,降低饲养效率;还会感染人,侵害多种器官。因此对鸡场进行真菌病调查;快速、准确的鉴定鸡烟曲霉菌,并建立特异、敏感、快速的诊断方法,对养鸡产业以及人类公共卫生都具有重要意义。经一年四季,采集鸡血清（共287份）,用ELISA方法检测（1,3）-β-D葡聚糖（G试验）和半乳甘露聚糖（GM试验）。G试验结果显示血清阳性率呈季节性变化,以夏季最高（28.6%）,其次为秋季（12.8%）、冬季（12.7%）、春季（12.0%）。GM试验结果与之相似。表明鸡真菌病呈季节性变化,夏季为主要流行季节。从河北省20个养鸡场分离疑似鸡烟曲霉菌7株。观察其形态,并提取分离株DNA,利用rDNA-ITS基因通用引物ITS1和ITS4进行PCR扩增,测序后序列与GenBank核酸数据库进行BLAST比对。结果显示,分离株呈绒毛状、辐射状生长,菌落中央为墨绿色,周边为白色。显微镜下菌丝呈棉花样,孢子梗顶端分散着球形分生孢子,成绿色或深绿色。分离株与GenBank鸡烟曲霉菌的同源性在99.8%以上,与同属菌同源性在69.4%-85.4%之间。形态学观察结合rDNA-ITS基因序列分析,将7株分离株鉴定为鸡烟曲霉菌。利用细胞表面蛋白基因（cell surface protein CSP基因）对鸡烟曲霉菌进行分型。结果共分为4种基因型:t04A型（1株）、t09c型（3株）、t18b型（1株）和t22b型（2株）。选用分离株（t09c型）对5日龄雏鸡喉头滴注1.9×109 CFU/m L菌悬液100μL。分别采集2份病料,用作菌培养、制备病理切片,切片行HE、PAS、GMS、CFW染色。结果雏鸡接种后3 d出现呼吸困难等症状,解剖发现气囊增厚,肺充血有黄色斑点;病料中分离鉴定出烟曲霉菌;显微镜下,肺充血,组织结构消失,特殊染色病灶内有大量菌丝。这些提示成功建立烟曲霉感染鸡模型。根据Genbank已发表的benAfum基因序列设计一对特异性引物,在此基础上建立检测鸡烟曲霉菌SYBR Green I荧光定量PCR方法,并用该方法对鸡烟曲霉菌分离株进行检测。结果显示,该方法灵敏度高,对鸡烟曲霉菌最低检出量为3.76×101CFU/mL;重复性好,变异系数在0.7%-0.8%;特异性强,与黄曲霉、土曲霉、黑曲霉、塔宾曲霉、白色念珠菌等病原菌无交叉反应;该方法操作简单,耗时短,整个试验过程只需2h。提示该方法可应用于鸡烟曲霉菌感染的快速检测。针对鸡白色念珠菌rDNA基因和鸡烟曲霉benAfum基因保守序列,设计两对特异性引物,建立了检测鸡烟曲霉菌和鸡白色念珠菌SYBR Green I荧光双重定量PCR方法。结果显示在熔解温度84.5℃-85.0℃和82.0℃-82.5℃分别出现鸡白色念珠菌和鸡烟曲霉菌特异波峰,且与其他真菌没有交叉反应;鸡白色念珠菌和鸡烟曲霉重复试验变异系数分别为0%、0.2%;最低检测浓度分别为4.34×101CFU/mL、3.76×101 CFU/mL。这提示该建立双重SYBR GreenⅠ定量PCR方法,特异、稳定、敏感,可用于鸡烟曲霉菌和鸡白色念珠菌的检测。将检测鸡白色念珠菌和鸡烟曲霉菌双重定量PCR的试剂组装成试剂盒,用分离株和病料样品,对其特异性、敏感性、重复性进行检测。结果均良好。