沉默Atg5对K562/ADM细胞阿霉素的化疗增敏作用

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目的:研究下调自噬相关基因Atg5的表达对人白血病阿霉素耐药细胞株K562/ADM化疗敏感性的影响。方法:1.体外培养K562/ADM细胞、NC-K562/ADM细胞、Atg5siRNA-K562/ADM细胞。2.利用小分子干扰RNA(siRNA)技术针对自噬相关基因Atg5设计合成特异性Atg5siRNA及与基因无同源性的阴性对照组scramble siRNA,然后在LipofectamineTM2000介导下分别转染至K562/ADM细胞,继续培养48小时后,通过蛋白印迹(Western Blotting)技术检测各细胞组(K562/ADM细胞、NC-K562/ADM细胞、Atg5siRNA-K562/ADM细胞)中Atg5蛋白的表达水平,验证Atg5siRNA沉默Atg5基因表达的效果。3.在Atg5siRNA下调Atg5蛋白表达的基础上,同样条件下予不同浓度组阿霉素处理各组细胞,48小时后再运用细胞增殖-毒性检测(CCK-8)方法分别检测K562/ADM细胞组、NC-K562/ADM细胞组、Atg5siRNA-K562/ADM细胞组中细胞的增殖情况。4.下调Atg5蛋白表达后,采用Western Blotting技术分别检测K562/ADM细胞组、NC-K562/ADM细胞组、Atg5siRNA-K562/ADM细胞组中自噬标志蛋白LC3-Ⅱ的表达水平,并比较各组细胞之间自噬水平的变化。结果:1.与K562/ADM细胞组及NC-K562/ADM细胞组相比较、Atg5siRNA-K562/ADM细胞组中Atg5蛋白表达的差异具有显著性(P<0.05),Atg5siRNA-K562/ADM细胞组中Atg5蛋白的表达水平明显下降,验证了Atg5siRNA能有效地沉默K562/ADM细胞中Atg5的基因表达。2.在Atg5siRNA下调Atg5蛋白表达的基础上,同样条件下不同浓度组阿霉素处理各组细胞后,与K562/ADM细胞组、NC-K562/ADM细胞组相比较,Atg5siRNA-K562/ADM细胞组的细胞存活率明显下降,即细胞对阿霉素的药物敏感性显著提高。3.下调Atg5蛋白表达后,Western Blotting检测到:较K562/ADM细胞组、NC-K562/ADM细胞组相比,Atg5siRNA-K562/ADM细胞组中LC3-Ⅱ的蛋白表达水平明显降低,即细胞自噬明显受到抑制。结论:Atg5siRNA可有效下调K562/ADM细胞中Atg5蛋白的表达,并通过抑制自噬来增强K562/ADM细胞对阿霉素的化疗敏感性。
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