【摘 要】
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为了进一步阐述AsO作用的分子生物学机制,我们首先应用RD-PCR技术,结合聚丙烯酚胺凝胶电泳和银染技术分离和显示了AsO作用K562细胞前后的cDNA片段,发现了11个差异表达的基因
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为了进一步阐述As<,2>O<,3>作用的分子生物学机制,我们首先应用RD-PCR技术,结合聚丙烯酚胺凝胶电泳和银染技术分离和显示了As<,2>O<,3>作用K562细胞前后的cDNA片段,发现了11个差异表达的基因片段.这些片段切胶回收后测序,结果提示它们与As<,2>O<,3>的作用密切相关.进一步我们收集了K562细胞的cDNA片段,取其中的一部分制备了包含162个cDNA片段的K562细胞cDNA表达谱芯片.应用此自制的芯片,与As<,2>O<,3>作用K562细胞前后的标记cDNA杂交.以研究As<,2>O<,3>诱导K562细胞凋亡前后基因表达的改变.提取As<,2>O<,3>作用K562细胞前后的总RNA,用SuperScriptⅡ逆转录酶逆转录成cDNA第一链,并在逆转录的过程中,用Cy3/Cy5荧光染料分别标记对照组/处理组,与自制的K562细胞基因表达谱芯片杂交.发现K562细胞经As<,2>O<,3>作用后,162个基因片段的表达都有所降低,其中25个基因片段的表达降低较为显著(Cy5/Cy3 <0.5).这些表达下调的基因片段包括转导因子、代谢酶、信号通路蛋白、激酶等.进一步分析发现有6个差异表达基因与As<,2>O<,3>的作用密切相关,并分别位于As<,2>O<,3>抑制细胞生长、诱导细胞凋亡的不同通路中.结合聚丙烯酚胺凝胶电泳的结果,我们认为抑制胰岛素样生长因子的功能,可能在As<,2>O<,3>诱导细胞凋亡的过程中起作用.
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