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目的：本实验以感染绵羊肺炎支原体的绵羊为动物疾病模型，使用重组的类泛素ISG15蛋白治疗感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊，然后用荧光定量PCR与ELISA的方法，测定各种细胞因子的表达变化，分析ISG15蛋白的先天性免疫调节和治疗作用。方法：（1）将冻存的绵羊肺炎支原体分离株增殖培养，测定菌液浓度并稀释到人工感染的浓度，然后将18只盘羊杂交羊随机分为A、B、C三个组，6只巴什拜羊为D组，全部气管内注射绵羊肺炎支原体，每天观察临床症状并检测体温，两周后，用无菌咽拭子随机采取各组试验羊的鼻腔分泌物，进行绵羊肺炎支原体培养与生化鉴定，检测动物人工感染情况。（2）在试验的第五天（5d），将人工感染绵羊肺炎支原体的羊使用纯化的蛋白对其治疗，其中A组和D组每天注射生理盐水；B组使用盘羊杂交羊的重组ISG15蛋白治疗，200μg/只·天，C组使用巴什拜羊的重组ISG15蛋白治疗，200μg/只·天，每天观察临床症状，检测体温；将死亡的患羊剖检观察肺脏病理变化，对比各组羊在治疗后的差别。（3）分别在感染前一天（0d）、感染后一天（1d）、感染后五天（5d）、一周（7d）、两周（14d）、三周（21d），采集新鲜的抗凝血，分离淋巴细胞。最后用荧光定量PCR检测试验羊血液中ISG15、IFN-γ、IL-12的表达水平，观察比较各组羊细胞因子的表达变化差异。（4）分别在感染前一天（0d）、感染后一天（1d）、感染后五天（5d）、一周（7d）、两周（14d）、三周（21d），采集新鲜的血液，析出血清，然后使用ELISA方法检测试验羊血清中IL-2、IL-4、IL-6的表达水平，观察比较各组羊细胞因子的表达变化差异。结果：（1）鼻腔分泌物的支原体培养物可使支原体专用培养基变黄，葡萄糖发酵试验、美蓝还原试验、红细胞吸附试验均为阳性，水解精氨酸试验、分解尿素试验均为阴性，溶血试验为β溶血，所有羊在感染后均出现了不同程度的发烧、咳嗽、食欲下降、腹泻等症状。说明全群人工感染成功。（2）没有治疗的A组盘羊杂交羊死亡3只，死亡率50%，D组巴什拜羊表现正常，B、C组治疗组没有羊死亡，但均有不同程度的咳嗽，流脓性鼻液，剖检后肺脏均有不同程度的出血点及出血斑。（3）在感染后的第1d，各组羊的IFN-γ表达水平与攻毒前略有下降,但第14d，B组显著高于A、D组（P＜0.05），第21d，B和C组显著高于A和D组（P＜0.05），治疗后IFN-γ的水平升高，说明各组羊的抵抗力增加；ISG15的表达量在第14d与21d，B、C、D组的表达水平显著高于A组（p＜0.05），治疗后B、C组ISG15表达水平比不治疗的A组显著升高，说明其抗病力与免疫调节能力增强；在感染后的第14d和21d，A组的IL-12表达水平显著高于其它各组（P＜0.05）。（4）各组羊在感染前IL-2的表达量基本一致，D组在感染后第5d显著低于A、B、C组（P＜0.05）；在感染后第7d，B、C组显著高于A组（P＜0.05），说明B、C组在治疗后抵抗力增加；感染后第14d与第7d相比，A组开始升高，D组开始降低，B、C组表达量没有明显变化，说明治疗后B、C组IL-2的表达量较A、D组稳定，治疗后其提高的抵抗力持续较久。IL-4的表达水平在感染后第7-21d，B、C组显著高于A、D组（P＜0.05），说明在治疗后B、C组体液免疫能力增强。D组的表达量变化不大。在7-21dA组羊IL-6的表达量比B、C、D组显著升高（P＜0.05），并保持在较高水平，说明A组羊的炎症程度较高，治疗组的炎症有改善。结论：使用重组的ISG15蛋白对易感的盘羊杂交羊治疗后，杂交羊对照组死亡率50%，治疗组没有死亡；杂交羊治疗组IFN-γ、ISG15、IL-12、IL-2表达水平在治疗后显著高于对照组，提高了抗病能力；杂交羊治疗组IL-6表达水平在治疗后显著低于对照组，改善了炎症状况。说明ISG15蛋白具有一定的免疫调节及治疗效果，为绵羊支原体肺炎临床治疗和新药的研发提供新的理论依据。