论文部分内容阅读
恶性肿瘤的发生涉及到内因（遗传因素）和外因（环境因素）等多种病因。其发生发展过程中有细胞内单个或多个癌基因的激活或抑癌基因的失活。由于免疫学、分子遗传学、生物化学和分子生物学等学科的迅速发展，人们对肿瘤的认识水平大大地提高。目前，已发现100多种癌基因和10多种抑癌基因。人们已经认识到癌是一种基因病。我们已利用基因表达谱芯片研究显示DDX24新基因在膀胱移行细胞癌（TCC）表达下调，推测膀胱移行细胞癌的发生发展可能与其表达有关。肿瘤相关基因的研究在肿瘤形成机制和探讨抗肿瘤新的治疗方法中均有十分重要的意义。本研究利用核酸分子原位杂交检测膀胱移行细胞癌DDX24新基因的转录水平和细胞定位，并与TCC分级分期的关系，以进一步探讨其在TCC的作用。材料与方法：一、标本来源8例正常膀胱组织取自脑死亡后尸解标本。32例膀胱癌均经病理科证实为膀胱移行上皮细胞癌，其中男25例，女7例，年龄21-83岁，按WHO病理分级，G115例、G212例、G35例，按UICCTNM分期Tis-T110例、T218例、T3-T44例，标本均于离体30分钟内液氮速冻，保存于-80℃待检。二、主要试剂与方法携带DDX24基因的质粒由本科杨庆博士惠赠。1、地高辛标记RNA探针的制备1.1PCR方法制备探针DNA模板1.2体外转录合成RNA探针对T3RNA聚合酶合成cRNA 第二军医大学 硕士毕业论文 探针；T郴聚合酶合成InRNA探针。2、取材和切片3、 切片的预处理4、杂交、杂交后冲洗显色（设空白、阳性、 阴性对照）5、封片并拍照 以上步骤均按复旦大学生命科学 院遗传工程重点实验室编写的组织细胞原位杂交操作规程进 行。三、结果判定采用半定量方法计算结果。染成棕黄色 的细胞超过切片中细胞总数学课50o／o为强阳性（＋＋），介于 10o／o－50o之间为阳性（＋），wtlo％为阴性（一）。四、统计 学处理采用非参数秩和检验。结果：DDXZ 4基因在正常膀 耽组织细胞表达均为强阳性，呈棕黄色颗粒，部分基质、血 管有不同程度着色。32例膀肮癌细胞表达强阳性仅2例，6 例表达阴性，24例表达阳性。两组之间DDX24基因表达强 度差异非常显著（u＝＝4．618，P＜0．of）。G；组与 GZ组表达强度 差异较显著（u＝2．235，0．of＜P＜．05）。G。组与Q组基因表达 无明显差异（u＝＝l．233，P＞0．05）。G；组与G3组表达强度差异 非常显著…习．762，P＜0．of卜随着分级的增高，DDX24基因 的表达强度下调。虽然Q组与q组差异不显著，但q组阴 性 25％而 G。组表达阴性 60％，差异不显著可能由于 G3组例 数较少的缘故。Tis－T；组与T。组表达强度差异不显著 （11＝t．283，P＞0，05）。TIS－T；组与 T3 －T4组 卜2．517，0．of＜P＜0．05)、L组与L－乙组（ur．517，0．of＜P＜0．05） 表达强度差异较显著。随着分期的增高，DDX24基因表达强 度有下降的趋势。结论：DDX24基因是最近发现的新基因， 4 第二军医大学 硕士毕业论文 属于 DEADHOX基因家族成员之一，定位于 14号染色体长 臂 32区，广泛分布在人体各种组织中。DEAD(BO基因蛋 白是一组公认的RNA解旋酶，其依赖ATP酶调节双链RNA 的解旋。DEAD书OX家族与DEAHHOX家族共同构成解旋 酶超家族JI。它们在DNA与许多不同RNA的代谢过程扮演 重要的作用，参与转录、InRNA的剪接、iNA的加工、 RNA的运输、启动翻译、核糖体的再生以及RNA的降解 等，对细胞的分化与发育起着关健的作用。解旋酶超家族基 因重排进行基因修复发挥重要作用，与遗传不稳定有密切的 关系。众所周知，增殖与分化的异常是癌细胞的重要生物学 特征。现己阐明，癌基因和抑癌基因的重要生理功能是调节 细胞的增殖与分化，其结构与表达的异常是细胞癌变的重要 分子生物学基础。已研究证实，解旋酶超家族基因的缺失、 突变与许多恶性肿瘤密切相关，发现平滑肌肉瘤、肝细胞 癌、血液系统的恶性均有解旋酶超家族基因位点的缺失、突 变。本研究利用核酸分子原位杂交具有特异性强、敏感性 高、定位精确，定量可能，可完整地保持组织细胞的形态，