各种血清色氨酸分析方法的比较和基于荧光衍生法的一种自动色氨酸分析仪的参数设计研究

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色氨酸是一种人体必需氨基酸。正常生理状态下,血液中90%以上的色氨酸被肝脏代谢。色氨酸对人体具有很重要的营养和生理作用,血液色氨酸含量可作为人体工作状态的一个“晴雨表”,对于临床诊疗具有重要的价值。测定血清色氨酸浓度的方法主要有:高效液相色谱法、高效毛细管电泳法、荧光衍生法、流动注射分析法等。但是高效液相色谱法等,或是仪器设备价格昂贵、维护复杂,或是测定流程繁琐、对操作人员要求较高,不适于临床色氨酸的测定工作。相比之下,Denckla和Dewey提出的荧光衍生法测定色氨酸技术,设备条件及操作流程相对最简单,且其准确性可满足临床要求。因此,若能基于该色氨酸衍生反应的机理设计出专用的色氨酸自动分析仪,则无疑对促进血液色氨酸含量这一生理指标在临床上的应用推广具有重要的意义。由此,首先需要确定该荧光衍生反应中操作参数的变化对衍生物荧光值的影响。通过对三氯乙酸浓度、甲醛浓度、三氯化铁浓度、反应时间、反应温度的单变量分析研究,找到了荧光测定结果对这些因素的变化不敏感时的对应操作参数的有效变动区间(平台区)。同时发现,反应溶液呈酸性对色氨酸的荧光衍生转化是必需的,且在2.0%-2.5%的三氯乙酸溶液中可得到较优的荧光测定结果,过高的三氯乙酸含量导致了衍生物荧光强度的降低。在此基础上进行血清色氨酸浓度测定的精密度实验时,批内变异系数4.7%,批间变异系数6.1%,平均回收率为95.1%、125%;其信号检测限0.5μmol/L,衍生物荧光值在1.0μmol/L-51.4μmol/L的色氨酸浓度区间内具有较好的线性关系。以常见21种氨基酸中具有代表性的10种氨基酸验证该方法的测定特异性时,发现这些氨基酸并不干扰色氨酸的测定,色氨酸的代谢产物色胺在实验条件下对其测定具有一定的干扰作用。
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