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背景和目的近年来,随着社会老龄化的不断进展,急性心肌梗死的患病率一直居高不下,目前已经成为了继癌症后死亡率最高的一种疾病[1]。因此,对于如何提高急性心梗的早期诊断,是对治疗急性心梗以及急性心梗的预后有着重大的意义。越来越多的研究表明急性心肌梗死发生后,将会伴随着大量的单核/巨噬细胞在梗死心肌区域的浸润,而且急性心梗的严重程度也和心肌炎症细胞浸润程度有关。因此,我们只要能够设计出一种探针,能够在发病早期精确的靶向于梗死心肌区域的单核/巨噬细胞,我们就不仅能够早期诊断急性心梗,同时可以判断急性心梗中炎症浸润程度,为后续对急性心梗治疗有一定的指导意义。TSPO,最早被科学家命名为外周型苯二氮卓类受体(PBR),它是一种分子量为18kDa的小分子转运蛋白存在于各物种当中,主要是位于线粒体外膜上转运类固醇、淄体激素等物质,而且随着进化保持着高度的同源性[2]。它能够在中枢神经系统的小胶质细胞内高度表达,随着小胶质细胞的活化与失活,表达量也随之产生变化,因此它可被用于反映中枢神经细胞的炎性活化并且在中枢神经系统疾病的监测当中得到了足够多的应用[3]。不仅如此,TSPO还可表达于外周血巨噬细胞(Macrophages)、单核细胞(monocytes)以及肺组织中的支气管上皮细胞、肺泡壁细胞中,并且在实验研究中已被用于某些外周炎性疾病的诊断,但需要注意的是与某些器官生理性摄取相区别。目前为了寻找一个更加优良的靶向外周炎症的探针,越来越多的学者把目光投向了 TSPO的研究当中,TSPO也许就是一个针对外周炎症新兴的诊断性和治疗性靶点,因此靶向TSPO的放射性配体不断被研制成功出来而被用于外周炎症的评价[5]。而本文则是通过放射性核素99mTc标记一个TSPO的新型配体,得到了放射性示踪剂99mTc-CB86,通过对其理化性质、体外稳定性的测定及其结合MicroSPECT显像探究其在大鼠心肌梗死模型中应用价值,以及后续在细胞、组织层面的探究,以期实现对早期急性心肌梗死炎症浸润的显像。方法1、第一步对标记前体CB86进行99mTc标记,标记后的产物经过HPLC纯化后进行理化性质的测定(主要包括在体外生理盐水、血清中的稳定性实验)。2、急性心肌梗死大鼠模型的制作,主要是进行永久性透壁冠脉结扎手术。3、急性心肌梗死大鼠模型制作后,模型制作是否成功的检测,主要包括超声心动图检测心功能及心电图检测ST段的改变。4、梗死心肌区域的确定,主要是利用静脉注射18F-FDG于MicroPET下观察确定。5、进行MicroSPECT显像,判断该示踪剂能否用于急性心肌梗死的显像。6、验证该示踪剂的确靶向于大鼠心肌的炎症梗死区域,主要是利用生物分布观察示踪剂在大鼠梗死心肌区域、正常心肌区域以及全身其他器官的分布状况,而后对大鼠心肌进行TTC染色和autoradiography,印证MicroSPECT图像的可靠性,最后通过免疫组化(Anti-PBR)确定心肌梗死区域是有TSPO的高表达。结果1、体外稳定性实验表明了 99mTc-CB86具有非常良好的生理盐水及血清稳定性,放置4h的放化纯>95%,证实99mTc-CB86具有良好的理化性质,因此可被用于活体成像。2、冠脉结扎后通过超声心动图可见大鼠心功能有明显受损,大鼠心肌前壁收缩、舒张运动幅度明显减低,EF明显下降(正常EF=84.5%,心梗EF=60.9%);同时通过心电图可见ST段抬高,说明大鼠已经出现心肌梗死。3、通过MicroPET显像已定位出大鼠心梗区域,阴茎静脉注射lmG99mTc-CB86进行MicroSPECT显像后,通过图像发现心梗区域已由放射性信号填充,说明已可以初步推断99"Tc-CB86已靶向心肌心梗区域通过MicroSPECT显像出来是可行的。4、由γ计数仪定量测量下心肌心梗区:非心梗区(ID%/g)=0.52±0.07:0.16±0.02,有明显对比度,但肝、脾、肺、肾、甲状腺腺体组织探针摄取较高。取模型大鼠心脏切片后,做TTC染色与autoradiography,TTC染色能够清楚显示出梗死区域,之后将切片做autoradiography,观察到心梗区域由放射性信号填充,由印证了MicroSPECT显像放射性信号确实是出现在心梗处。5、进一步验证MicroSPECT显像中心肌梗死区域放射性浓聚是由于99mTc-CB86靶向于心梗区TSPO高表达,由此我们取下心梗心肌切片做免疫组化,证明该区域的确有TSPO高表达。通过心肌切片做HE染色,我们找到炎症细胞,通过免疫组化(Anti-PBR)染色,我们发现炎症细胞浸润处有明显的TSP0高表达。结论通过实验印证99mTc-CB86有良好的体外理化性质,因此可被用于大鼠的活体成像。而后我们完成了 99mTc-CB86探针在大鼠心肌梗死模型中MicroSPECT显像的初步研究。这对我们后面要进行的探针在大鼠体内的药物代谢动力学研究具有一定的指导作用,同时提供更多的急性心肌梗死病理机制的相关信息,以及应用于疾病的早期诊断。