可见光诱导体外培养兔视网膜色素上皮细胞凋亡的实验研究

• 作 者: 闫利锋
• 机 构: 山西医科大学
• 出 处: 山西医科大学
• 发表日期: 2004年01期
• 关键词: 光损伤 视网膜色素上皮 细胞凋亡 Bcl-2 流式细胞术

目的：研究可见光对体外培养的兔视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE) 细胞凋亡的影响。方法：用两步酶法消化分离、培养并鉴定RPE细胞。以白色荧光灯为光源，用3652(±213)lux光照强度照射RPE细胞。细胞分为4个组，分别为无光照组(Ⅰ组)、光照3小时组(Ⅱ组)、6小时组(Ⅲ组)和9小时组(Ⅳ组)。每组又分别在光照后3、12、24、72h终止培养进行流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞测定检测。其中各组培养24h细胞进行细胞周期的测定，观察RPE细胞的增殖状态和凋亡情况；Ⅰ组和Ⅲ组光照前和光照后不同培养时刻点取细胞进行Bcl-2mRNA原位杂交检测，观察细胞bcl-2 基因表达情况。选取部分Ⅲ24细胞进行透射电镜的观察。结果：细胞光照后透射电镜观察到凋亡小体、核碎裂细胞形态学变化。光照后3h，bcl-2mRNA原位杂交阳性细胞数无明显改变；光照后12h,24h,72h阳性细胞逐渐减少 (P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示可见光损伤可引起RPE细胞凋亡与坏死。Ⅱ24细胞凋亡率为(11.45±1.78)%，Ⅲ3细胞凋亡率为(5.80±0.77)%，Ⅲ24 细胞凋亡率为(18.49±0.88)%。Ⅱ12细胞坏死率为(1.12±0.56)%，Ⅱ72细胞坏死率为(1.46±0.39)%，Ⅳ12细胞坏死率为(5.33±1.05)%。随着光照时间和光照后培养时间的延长，细胞凋亡率和细胞坏死率亦逐渐升高，比较组间差异有统计学意义(P<0.05) 。短时间(3h,6h)光照主要引起细胞凋亡，而长时间(9h)光照细胞坏死更明显。光照后较短培养时间(3h,12h,24h)主要是细胞凋亡，而培养较长时间(72h)坏死显著增加。随着光照时间的延长，细胞增殖指数下降，凋亡率增加(P<0.05)。 结论：一定强度的可见光照射可引起体外RPE的凋亡。可见光损伤可引起细胞凋亡及坏死，其程度随着光照时间和光照后培养时间的延长而增加。细胞凋亡在一定条件下可转化为细胞坏死。一定程度的光照可以影响细胞进入其细胞周期。