【摘 要】
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果糖1,6-二磷酸酯酶是糖代谢过程中的关键酶.它是一个典型的别构酶,AMP是它的别构抑制剂,在动物肌肉酶中,AMP的抑制常数很小比肝脏酶(肾脏酶)低一个数量级,而且在碱性pH下AMP
【机 构】
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中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所
【出 处】
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中国科学院上海生物化学研究所 中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学
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果糖1,6-二磷酸酯酶是糖代谢过程中的关键酶.它是一个典型的别构酶,AMP是它的别构抑制剂,在动物肌肉酶中,AMP的抑制常数很小比肝脏酶(肾脏酶)低一个数量级,而且在碱性pH下AMP对蛇肌酶有明显的激活作用.为了解析蛇肌酶的一级结构,该实验中构建了蛇肌cDNA文库,采用RT-PCR和RACEPCR方法,克隆了蛇肌酶完整的cDNA.该cDNA含有66bp的上游序列,1020bp的编码区和323bo的3非翻译序列,由cDNA推测出该酶的340个氨基酸(含起始的Met)顺序与已知的猪肾酶、人肝酶和人肌酶的同源性分另为72.2﹪、74.0﹪和88.5﹪.将蛇肌酶的完整编码区克隆至表达载体pET11a,在大肠杆菌中BL21(DE3)得到高效表达.菌体裂解液经过Q-SepharoseFastFlow柱层析的活力峰,脱盐后吸附在磷酸纤维素柱上,经底物洗脱得到SDS-PAGE均一的重组酶.该重线酶表现出与组织酶相同的酶学性质,如此活力、AMP的高亲和力(K<,i>为0.85﹪μmol/L)碱性pH条件下AMP对酶的明为激活作用和钾离子的激活现象等.与Laval大学林胜祥教授合作,我们解出了蛇肌酶的X-晶体结构、其空间结构与猪肾酶基本相同,这是首次报道的肌肉酶的晶体结构.
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