【摘 要】
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从人血浆中提取ApoAI,产量低、步骤繁、成本高、安全性差,很难实现靶向药物的产业化.因此,我们决定运用毕赤氏酵母表达系统进行ApoAI的表达研究,将获得的rApoAI作为一个新的
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从人血浆中提取ApoAI,产量低、步骤繁、成本高、安全性差,很难实现靶向药物的产业化.因此,我们决定运用毕赤氏酵母表达系统进行ApoAI的表达研究,将获得的rApoAI作为一个新的载体,为制备新型的靶向药物创造条件.根据酵母偏爱密码子重新设计apoAI cDNA,用化学法合成修改后的apoAI cDNA,并将该cDNA插入pBS SK质粒的XhoI、EcoRI位点.用限制酶将sBS-apoAI质粒上apoAI cDNA切下,分别插入分泌型载体pPIC9和pPIC9K.将重组的pPIC9K-apoAI用BglII酶切后,转化Pichia pastoris GS115菌株,筛选获得具G418高抗性的apoAI cDNA多拷贝串联整合的转化子.转化子经摇瓶发酵和甲醇诱导,上清液用SDS-PAGE检测,有明显的ApoAI表达.经Pheny-sepharose 6(Fast Flow)疏水层析柱和Sephadex G-50(coarse)分子筛层析,得到的ApoAI蛋白纯度大于90％.经蛋白印迹反应和蛋白N-末端氨基酸顺序测定的证明,毕赤氏酵母表达的rApoAI与人血浆提取的ApoAI基本一致.
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