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Pokemon(POK红系髓性致癌因子),又名FBI-1、LRF和OCZF,由Zbtb7A基因编码,是POZ-ZF家族成员之一。POZ-ZF家族成员含有N端的POZ功能区和C端的由Kruppel样锌指组成的DNA结合域,它们通过招募组蛋白脱乙酰酶(histone-deacetylases,HDAC)及随后的染色体重铸扮演着转录抑制因子的作用。POZ区是一段高度保守的蛋白-蛋白相互作用域,已被证明可与其它蛋白的POZ区形成同源或异源二聚体。Pokemon在人类许多肿瘤组织中高水平表达。在小鼠胚胎成纤维细胞中,过表达的Pokemon可特异性抑制抑癌基因p19arf的表达,以ARF-MDM2-P53的致癌模式导致癌细胞分化。可是,Pokemon许多重的要细胞生物学机制仍不清楚。因此,本论文主要探讨Pokemon在胃腺癌细胞系BGC823中的生物学功能及其机制。 首先,将Pokemon基因的编码序列构建到高效表达载体pcDNA3.1(+)载体中获得pcDNA3.1-pokemon。构建有效沉默Poekemon的干扰载体pSilencer3.1-H-3#。利用构建好的质粒转染胃腺癌细胞系BGC823,实现Pokemon基因的高表达或基因沉默,对Pokemon在BGC823的凋亡用流式细胞仪做了检测。高表达的Pokemon可明显抑制癌细胞系BGC823的凋亡,而沉默Pokemon表达可促进BGC823细胞的凋亡。其次,我们对与癌症发生密切相关且变化显著的几个基因P53和IL6等进行了RT-PCR分析,并用ARF作为阳性对照。我们发现ARF、P53和IL6与Pokemon的表达具有相关性。P53的mRNA随着Pokemon的mRNA变化而变化:Pokemon高表达时,P53的mRNA减少;Pokemon被沉默掉后,P53的mRNA升高。这指示了Pokemon的可能抑制P53转录。另外,当Pokemon高表达时,IL6的mRNA表达上调,这提示Pokemon在促进癌进展过程中也在发挥着重要作用。 综上所述,本研究构建了Pokemon在真核细胞中的高表达/干扰系统。检测到高表达Pokemon可抑制癌细胞凋亡,而Pokemon基因沉默则促进凋亡。P53和IL6与Pokemon的表达具有相关性,提示P53和IL6可能为Pokemon下游调控的靶基因。