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目的：探讨靶向血管内皮生长因子治疗视网膜母细胞瘤的效果。
材料和方法：用逆转录聚合酶链反应(RT-PcR)方法检测6例RB标本和两种RB细胞(SO—RB50和HXO—RB44)中VEGF及其受体VEGFRl／2(Flt／Flk)基因表达，对检测结果进行半定量分析，以免疫组化方法鉴定RB标本中VEGF蛋白表达情况。构建VEGF小干扰RNA(siRNA)表达质粒p1．0CMV-VEGF siRNA和p4.1CMV-VEGF siRNA，分别瞬时和稳定转染2种RB细胞，同时分别用p1.OCMV-Neg siRNA和p4.1CMV-Neg siRNA作阴性对照转染，对照组质粒编码的siRNA与哺乳动物基因组无明显同源性；空白对照不作任何处理；用RT-PCR和酶联免疫吸附(ELISA)方法检测瞬时转染后VEGF基因和蛋白表达，稳定转染后，VEGF基因表达以荧光半定量PCR(FQ—PCR)方法确定，VEGF蛋白表达则通过ELISA和蛋白印迹(western blot)方法检测。将RB细胞悬液(1×10<7>细胞／100u1)裸鼠右前肢背部皮下接种，建立RB移植瘤模型；4周后成瘤鼠被随机平均分为3组，组1和组2分别给予0.5mg／ml和lmg／ml的VEGF siRNA溶液处理，组3以PBS处理作为对照，每2天1次，连续处理14天；用游标卡尺测量移植瘤直径，计算肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线；采用FQ—PCR和westernblot方法检测移植瘤中VEGF表达水平。最后用Annexin V和caspase-3方法探讨沉默VEGF基因表达后SO—RB50细胞凋亡情况。
结果：6例RB标本和2种RB细胞中均有VEGF基因及其受体VEGFRl／2表达，其中VEGFR2基因表达明显高于VEGFRl(均p<0.05)，但2种RB细胞中VEGF基因表达无显著差异(p>0.05)，RB标本中VEGF蛋白呈强阳性表达。p1.OCMV-VEGF siRNA瞬时转染后，2种RB细胞中VEGF基因和蛋白表达均显著降低(均p<0.05)。p4.1CMV-VEGF siRNA稳定转染后，2种RB细胞中VEGF基因下降约80％左右(均p<0.01)，实验组细胞上清液中VEGF蛋白浓度和对照组存在显著差异(均p<0.01)，实验组细胞内VEGF蛋白也表达减少。 VEGFsiRNA处理的2种RB移植瘤中VEGF基因表达降低(均p<0.01)，蛋白水平下降，肿瘤平均体积显著小于对照组(均p<0.01)，且高剂量VEGF siRNA组比低剂量组作用更明显。沉默VEGF表达后后SO-RB50细胞凋亡加速(均p<0.05)。
结论：RB标本和RB细胞均表达VEGF和VEGFR1/2基因，VEGFR表达以VEGFR2为主，为VEGF参与RB形成提供了丰富的下游信号；VEGF siRNA表达质粒稳定转染和瞬时转染，均可作为体外抑制RB细胞中VEGF表达的方法，RB研究中可依据不同需要选用；干扰VEGF表达，能抑制RB移植瘤生长，降低肿瘤体积；沉默VEGF表达可促进SO-RB50细胞凋亡，调控细胞失凋亡可能是VEGF参与RB形成的机制之一；靶向VEGF的RNAi有望为RB临床治疗研究提供有新思路和新方法。