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Gadd45α是细胞生长停滞与DNA损伤诱导蛋白45(Gadd45)家族成员之一,在细胞生长抑制、DNA损伤后诱导细胞凋亡及肿瘤抑制中具有重要作用,参与细胞生长的负性调控,瞬时转染Gadd45α可诱导肿瘤细胞发生凋亡,具有维护基因组稳定性的功能。有研究表明:Gadd45α是保护表皮不被紫外线诱导转化的关键因子,对上皮源性肿瘤中的原癌基因起负性调节作用。本课题通过诱导正常角质形成细胞(HaCaT)及人表皮癌细胞株(A431)上调Gadd45α表达及对各细胞生物学行为的影响,初步探讨Gadd45α在皮肤鳞状细胞癌中的作用。
1窄谱中波紫外线对HaCaT细胞Gadd45±表达及细胞增殖、凋亡的影响
HaCaT细胞分别经100mJ/cm2、200 mJ/cm2、400 mJ/cm2311nm NB—UVB照射后,应用半定量RT—PCR、western blot法检测发现:HaCaT细胞表达Gadd45α,随照射剂量增加,Gadd45α mRNA及蛋白表达升高;不同剂量311 nm NB—UVB照射后对HaCaT细胞有抑制作用,其抑制增殖作用呈量效及时效关系;照射后HaCaT细胞周期出现G2期阻滞,并促进细胞凋亡。
2 HaCaT和M31细胞中6add45α表达差异
应用RT—PCR、western blot及细胞免疫化学法检测HaCaT和A431细胞Gadd45α表达。结果显示:HaCaT细胞表达Gadd45α,Gadd45α表达在维持HaCaT细胞的增殖和分化中可能有一定作用；A431细胞表达减弱,下调Gadd45α表达可能参与了其恶性生物学行为。
3曲古菌素A对A431细胞Gadd45α表达及对细胞增殖、凋亡的影响
应用不同浓度曲古菌素A处理A431细胞。结果显示:曲古菌素A对细胞有抑制作用,其抑制增殖作用呈量效及时效关系；不同浓度曲古菌素A处理A431细胞后,细胞周期发生G1期阻滞,细胞凋亡增加；不同浓度曲古菌素A处理后,A431细胞Gadd45α mRNA及蛋白表达升高。Gadd45α可能参与了A431细胞增殖抑制、周期阻滞,并可诱导细胞凋亡。
4 Gadd45α蛋白在皮肤鳞状细胞癌组织中的表达
应用免疫组织化学方法检测发现:在高分化皮肤鳞状细胞癌组,Gadd45α蛋白表达阳性表达率较中低分化组表达上调。
以上研究结果说明:诱导HaCaT、A431细胞上调Gadd45α表达后均可抑制细胞增殖,6add45α可能参与了细胞周期阻滞并促进凋亡；皮肤鳞状细胞癌组织中存在Gadd45α表达异常,Gadd45α可能参与了皮肤鳞状细胞癌的发生过程。