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随着对肿瘤分子发病机制的研究深入,肿瘤的免疫治疗目前正成为一种全新的治疗模式,即从肿瘤的各种免疫逃逸机制作为切入点,尝试通过干预机体的抗肿瘤免疫的缺陷来提高机体自身杀伤消灭肿瘤细胞的能力。程序性死亡分子-1（programmed death 1,PD-1）/PD-1配体（programmed death ligand 1,PD-L1）信号通路和调节性T细胞（Treg）可通过不同的作用机制发挥免疫负性调控作用,从而抑制机体的抗肿瘤免疫反应。在肿瘤细胞的表面可检测到PD-L1分子的高表达状态。PD-L1作为配体,与肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）表面表达的受体PD-1分子结合,传递协同刺激信号中的负性信号,导致细胞毒性T细胞（CTL）不能有效发挥抗肿瘤作用,最终肿瘤细胞发生免疫逃逸。有研究发现肿瘤浸润的T淋巴细胞中,Treg细胞所占比例明显升高,且具有抗肿瘤活性效应的T淋巴细胞受其抑制。此外,PD-1/PD-L1信号通路在Treg细胞的生成过程中起诱导促进作用,且Treg细胞抑制功能稳定的维持也有PD-1/PD-L1信号通路的参与。但在肺癌细胞的逃避机体的抗肿瘤免疫反应的过程中,Treg细胞是否存在异常增高的现象、其增高是否与肿瘤细胞表面表达的PD-L1分子有关、PD-1分子在肺癌患者外周血Treg细胞表面的表达特点及其相关临床意义的研究尚不多见。在本研究中,我们建立了肺癌细胞株与人外周血T淋巴细胞的共培养体系,通过检测共培养体系中人外周血T淋巴细胞向Treg细胞分化的水平,从而揭示肺癌细胞表面表达的PD-L1分子是否可诱导Treg细胞的分化;通过用抗PD-L1抗体特异性阻断PD-L1分子的表达,进一步了分析了PD-L1分子在诱导Treg细胞的分化中的作用;同时也对肺癌病人外周血中Treg细胞表面PD-1分子的表达水平及其临床特征作了分析,进一步探究了PD-1/PD-L1信号通路在肺癌患者体内Treg细胞生成中的调节作用。一、肺癌细胞株表面PD-L1分子对诱导Treg细胞生成的调节作用【目的】检测3株肺癌细胞株表面PD-L1分子的表达水平,并分析其诱导Treg细胞的分化生成的能力。【方法】采用流式细胞术荧光标记人肺癌细胞株表面pd-l1分子,测定其表达水平。分离出健康人外周静脉血中单个核细胞（pbmc）后,利用免疫磁珠法分选出人外周血t淋巴细胞。用植物血球凝集素（pha）刺激人外周血t淋巴细胞;外周血t淋巴细胞被活化后,与肺癌细胞进行共培养,将实验细胞分为3组:a组:肺癌细胞+t细胞+pha组;b组:肺癌细胞+t细胞+pha+tgf-β组;c组:肺癌细胞+t细胞+pha+tgf-β+抗pd-l1抗体组,最后流式细胞术分别检测各组培养体系中人外周血t淋巴细胞向treg细胞分化的比例。【结果】我们检测了3株人肺癌细胞表面pd-l1分子的表达水平,发现spca-1细胞表面表达pd-l1分子最高,我们选取了spca-1细胞进行共培养试验。通过将活化成功的t淋巴细胞与spca-1细胞进行共培养发现,a组活化的人外周血t淋巴细胞分化为treg细胞比例较少;b组活化的外周血t淋巴细胞分化成treg细胞的比例较高;在使用抗pd-l1特异性单克隆抗体的c组中,活化的人外周血t淋巴细胞分化成treg细胞的比例较b组明显降低。【结论】pd-l1分子不同程度的表达于肺癌细胞的表面;pd-l1分子可联合tgf-β细胞因子诱导促进人外周血t淋巴细胞向treg细胞的分化,从而促使肿瘤的发生、发展。二、肺癌患者外周血中treg细胞及其表面pd-1分子的表达水平及相关临床意义【目的】检测肺癌患者外周血中treg细胞及其表面pd-1分子的表达水平并分析其临床意义。【方法】选择2014年12月至2015年5月苏州大学附属第二医院呼吸科收治的初诊肺癌患者22例,同时选择体检中心性别、年龄相匹配的25名健康体检者作为对照组。流式细胞术用来检测人外周血单个核细胞（pbmc）中cd4+cd25+cd127lowtreg细胞的比例及其表面pd-1分子的表达水平,探讨treg及其表面pd-1分子在不同临床病理特征中的表达情况。【结果】肺癌患者外周血cd4+cd25+cd127lowtreg占cd4+t细胞比例较健康人显著上调（P<0.01）。肺癌患者外周血CD4+CD25+CD127lowTreg细胞表面PD-1分子表达较健康人也显著上调（P=0.001）。在根据年龄、性别、有无吸烟史、肿瘤大小、有无淋巴结转移分类的亚组分析中,肺癌患者外周血CD4+CD25+CD127lowTreg细胞比例及其表面PD-1分子的表达无明显差异（均P>0.05）,但在不同临床分期之间有显著差异（P<0.05）。【结论】肺癌患者外周血中Treg细胞及其表面PD-1分子较正常人相比明显增多,与肺癌的分期有关,因此Treg细胞及其表面PD-1分子可能参与了肺癌的发生、发展。通过检测外周血Treg细胞数量的多少及其表面PD-1的表达情况可能反映肺癌对宿主免疫系统杀伤的逃逸能力。综上,我们得到了以下几个主要结果:（1）:肺癌细胞的表面存在不同水平PD-L1分子表达;PD-L1分子联合TGF-β细胞因子可以诱导促进人外周血T淋巴细胞向Treg细胞的分化,从而促使肿瘤的发生、发展。（2）通过抗PD-L1单抗阻断PD-1/PD-L1信号途径可减少Treg细胞的生成数量。（3）肺癌患者外周血中Treg细胞及其表面PD-1分子较正常人增多,且与肺癌的分期有关;因此Treg及作为其表面抑制性功能分子的PD-1可能影响了肺癌的发生、发展。