论文部分内容阅读
目的：
探讨妊娠期慢性应激诱导子代雄鼠抑郁的作用机制。
方法:
第一部分：
将30只雌性SD孕鼠随机分为正常处理组和慢性应激组，子鼠出生后选取雄性子鼠，分为妊娠期正常对照+子代对照组（CON组）、妊娠期正常对照+子代侧脑室注射CRHR1拮抗剂组（CON+ANT组）、妊娠期慢性应激+子代侧脑室注射CRHR1拮抗剂组（CUMS+ANT组）、妊娠期慢性应激+子代对照组（CUMS组）。子代雄鼠出生后10-30天侧脑室微量注射CRHR1拮抗剂，对照组注射溶剂。第31后通过糖水偏好实验和强迫游泳实验检测子代的抑郁程度；运用HE染色技术观察海马CA3区神经元的病理改变；海马脑组织CRH水平使用ELISA试剂盒进行检测；Western blot技术测定海马组织mTOR和p-mTOR（Ser2448）蛋白含量。
第二部分：
采用8周龄（flox/flox）小鼠雌鼠（CRHR1基因正常表达）与（flox/+，with cre）小鼠雄鼠（海马CRHR1基因条件性敲除）合笼，待母鼠怀孕后将其随机分为正常处理组和慢性应激组，子鼠出生后选取雄性子鼠，分为妊娠期正常对照+子代基因正常组（CON组）、妊娠期正常对照+子代海马CRHR1基因敲除杂合子组（CON+CKOH组）、妊娠期正常对照+子代海马CRHR1基因敲除纯合子组（CON+CKOA组）、妊娠期慢性应激+子代基因正常组（CUMS组）、娠期慢性应激+子代海马CRHR1基因敲除杂合子组（CUMS+CKOH组）、娠期慢性应激+子代海马CRHR1基因敲除纯合子组（CUMS+CKOA组）。通过糖水偏好实验、悬尾实验和强迫游泳实验检测子代的抑郁程度；运用TUNEL染色观察海马CA3区神经元病理改变；海马脑组织CRH水平使用ELISA试剂盒进行检测；Western blot技术测定海马组织mTOR和p-mTOR（Ser2448）蛋白含量。
结果:
第一部分
1.糖水偏好实验结果显示：与CON组相比，CUMS组大鼠糖水偏好率下降（P<0.05），与CUMS组相比，CUMS+ANT组糖水偏好率升高（P<0.05）；强迫游泳实验结果显示：与CON组相比，CUMS组大鼠不动时间增长（P<0.05），与CUMS组相比，CUMS+ANT组不动时间减少（P<0.05）。
2.HE结果显示：CON组大鼠海马CA3区神经元形态清晰，数量较多，且排列紧凑，CUMS组海马CA3区神经元数量减少、排列松散，形态不清，细胞核固缩。而CUMS+ANT组大鼠海马CA3区神经元数量增多，排列较整齐，核仁着色浅，与CUMS组相比有明显改善。
3.WB结果显示：与CON组相比，CUMS组和CUMS+ANT组海马mTOR表达量均降低（P＜0.05），与CUMS组相比，CUMS+ANT组海马mTOR和p-mTOR表达量升高（P＜0.05）。
4.ELISA结果显示：与CON组相比，CUMS组海马CRH水平明显升高（P＜0.05），与CUMS组相比，CUMS+ANT组海马CRH水平下降（P＜0.05）。
第二部分
1.强迫游泳结果显示：CON组、CON+CKOH组和CON+CKOA小鼠强迫游泳不动时间差异无显著性。与CON组相比，CUMS组、CUMS+CKOH组和CUMS+CKOA组不动时间均增长（P＜0.05）；与CUMS组相比，CUMS+CKOA组不动时间减少显著（P＜0.05），但CUMS组与CUMS+CKOH组不动时间差异无显著性。悬尾实验结果显示：CON组、CON+CKOH组和CON+CKOA组悬尾不动时间差异无显著性。与CON组相比，CUMS组、CUMS+CKOH组和CUMS+CKOA组不动时间均增长（P＜0.05）；与CUMS组相比，CUMS+CKOA组不动时间减少显著（P＜0.05）。糖水偏好结果显示，与CON组相比，CUMS组、CUMS+CKOH组和CUMS+CKOA组糖水偏好率均下降（P＜0.05）；与CUMS组相比，CUMS+CKOH组和CUMS+CKOA组糖水偏好率明显上升（P＜0.05）。
2.TUNEL染色结果显示：CON组、CON+CKOH组和CON+CKOA组TUNEL染色阳性细胞数量无明显差异，凋亡指数无明显差异。与CON组相比，CUMS组、CUMS+CKOH组和CUMS+CKOA组TUNEL染色阳性细胞数量均增多，凋亡指数增高（P＜0.05），与CUMS组相比，CUMS+CKOA组凋亡指数下降（P＜0.05）。
3.WB结果显示：与CON组相比，CUMS组、CUMS+CKOH组和CUMS+CKOA组mTOR表达均下降（P＜0.05）；与CUMS组相比，CUMS+CKOA组mTOR表达显著升高（P＜0.05），但CUMS+CKOH与CUMS组相比差异无统计学意义。CON组、CON+CKOH组和CON+CKOA组小鼠p-mTOR表达差异无显著性。与CON组相比，CUMS组、CUMS+CKOH组和CUMS+CKOA组p-mTOR表达均下降（P＜0.05）；与CUMS组相比，CUMS+CKOA组p-mTOR表达显著升高（P＜0.05），但CUMS+CKOH与CUMS组相比差异无统计学意义。
4.ELISA结果显示：CON组、CON+CKOH组和CON+CKOA组小鼠海马CRH水平差异无显著性。与CON组相比，CUMS组、CUMS+CKOH组海马CRH水平均上升（P＜0.05）；与CUMS组相比，CUMS+CKOA组海马CRH水平显著降低（P＜0.05），但CUMS+CKOH与CUMS组相比差异无统计学意义。
结论:
妊娠期慢性应激可使得子代出现抑郁样行为，其作用机制可能是妊娠期慢性应激诱导子代CRH水平升高，作用于海马CRHR1，从而抑制mTOR通路激活，导致海马CA3区神经元损伤，进而使子代抑郁。
探讨妊娠期慢性应激诱导子代雄鼠抑郁的作用机制。
方法:
第一部分：
将30只雌性SD孕鼠随机分为正常处理组和慢性应激组，子鼠出生后选取雄性子鼠，分为妊娠期正常对照+子代对照组（CON组）、妊娠期正常对照+子代侧脑室注射CRHR1拮抗剂组（CON+ANT组）、妊娠期慢性应激+子代侧脑室注射CRHR1拮抗剂组（CUMS+ANT组）、妊娠期慢性应激+子代对照组（CUMS组）。子代雄鼠出生后10-30天侧脑室微量注射CRHR1拮抗剂，对照组注射溶剂。第31后通过糖水偏好实验和强迫游泳实验检测子代的抑郁程度；运用HE染色技术观察海马CA3区神经元的病理改变；海马脑组织CRH水平使用ELISA试剂盒进行检测；Western blot技术测定海马组织mTOR和p-mTOR（Ser2448）蛋白含量。
第二部分：
采用8周龄（flox/flox）小鼠雌鼠（CRHR1基因正常表达）与（flox/+，with cre）小鼠雄鼠（海马CRHR1基因条件性敲除）合笼，待母鼠怀孕后将其随机分为正常处理组和慢性应激组，子鼠出生后选取雄性子鼠，分为妊娠期正常对照+子代基因正常组（CON组）、妊娠期正常对照+子代海马CRHR1基因敲除杂合子组（CON+CKOH组）、妊娠期正常对照+子代海马CRHR1基因敲除纯合子组（CON+CKOA组）、妊娠期慢性应激+子代基因正常组（CUMS组）、娠期慢性应激+子代海马CRHR1基因敲除杂合子组（CUMS+CKOH组）、娠期慢性应激+子代海马CRHR1基因敲除纯合子组（CUMS+CKOA组）。通过糖水偏好实验、悬尾实验和强迫游泳实验检测子代的抑郁程度；运用TUNEL染色观察海马CA3区神经元病理改变；海马脑组织CRH水平使用ELISA试剂盒进行检测；Western blot技术测定海马组织mTOR和p-mTOR（Ser2448）蛋白含量。
结果:
第一部分
1.糖水偏好实验结果显示：与CON组相比，CUMS组大鼠糖水偏好率下降（P<0.05），与CUMS组相比，CUMS+ANT组糖水偏好率升高（P<0.05）；强迫游泳实验结果显示：与CON组相比，CUMS组大鼠不动时间增长（P<0.05），与CUMS组相比，CUMS+ANT组不动时间减少（P<0.05）。
2.HE结果显示：CON组大鼠海马CA3区神经元形态清晰，数量较多，且排列紧凑，CUMS组海马CA3区神经元数量减少、排列松散，形态不清，细胞核固缩。而CUMS+ANT组大鼠海马CA3区神经元数量增多，排列较整齐，核仁着色浅，与CUMS组相比有明显改善。
3.WB结果显示：与CON组相比，CUMS组和CUMS+ANT组海马mTOR表达量均降低（P＜0.05），与CUMS组相比，CUMS+ANT组海马mTOR和p-mTOR表达量升高（P＜0.05）。
4.ELISA结果显示：与CON组相比，CUMS组海马CRH水平明显升高（P＜0.05），与CUMS组相比，CUMS+ANT组海马CRH水平下降（P＜0.05）。
第二部分
1.强迫游泳结果显示：CON组、CON+CKOH组和CON+CKOA小鼠强迫游泳不动时间差异无显著性。与CON组相比，CUMS组、CUMS+CKOH组和CUMS+CKOA组不动时间均增长（P＜0.05）；与CUMS组相比，CUMS+CKOA组不动时间减少显著（P＜0.05），但CUMS组与CUMS+CKOH组不动时间差异无显著性。悬尾实验结果显示：CON组、CON+CKOH组和CON+CKOA组悬尾不动时间差异无显著性。与CON组相比，CUMS组、CUMS+CKOH组和CUMS+CKOA组不动时间均增长（P＜0.05）；与CUMS组相比，CUMS+CKOA组不动时间减少显著（P＜0.05）。糖水偏好结果显示，与CON组相比，CUMS组、CUMS+CKOH组和CUMS+CKOA组糖水偏好率均下降（P＜0.05）；与CUMS组相比，CUMS+CKOH组和CUMS+CKOA组糖水偏好率明显上升（P＜0.05）。
2.TUNEL染色结果显示：CON组、CON+CKOH组和CON+CKOA组TUNEL染色阳性细胞数量无明显差异，凋亡指数无明显差异。与CON组相比，CUMS组、CUMS+CKOH组和CUMS+CKOA组TUNEL染色阳性细胞数量均增多，凋亡指数增高（P＜0.05），与CUMS组相比，CUMS+CKOA组凋亡指数下降（P＜0.05）。
3.WB结果显示：与CON组相比，CUMS组、CUMS+CKOH组和CUMS+CKOA组mTOR表达均下降（P＜0.05）；与CUMS组相比，CUMS+CKOA组mTOR表达显著升高（P＜0.05），但CUMS+CKOH与CUMS组相比差异无统计学意义。CON组、CON+CKOH组和CON+CKOA组小鼠p-mTOR表达差异无显著性。与CON组相比，CUMS组、CUMS+CKOH组和CUMS+CKOA组p-mTOR表达均下降（P＜0.05）；与CUMS组相比，CUMS+CKOA组p-mTOR表达显著升高（P＜0.05），但CUMS+CKOH与CUMS组相比差异无统计学意义。
4.ELISA结果显示：CON组、CON+CKOH组和CON+CKOA组小鼠海马CRH水平差异无显著性。与CON组相比，CUMS组、CUMS+CKOH组海马CRH水平均上升（P＜0.05）；与CUMS组相比，CUMS+CKOA组海马CRH水平显著降低（P＜0.05），但CUMS+CKOH与CUMS组相比差异无统计学意义。
结论:
妊娠期慢性应激可使得子代出现抑郁样行为，其作用机制可能是妊娠期慢性应激诱导子代CRH水平升高，作用于海马CRHR1，从而抑制mTOR通路激活，导致海马CA3区神经元损伤，进而使子代抑郁。