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目的检测过表达人核糖核酸酶抑制因子(Ribonuclease inhibitor, RI)基因的质粒对人膀胱癌侵袭转移及上皮细胞间质转化(Epithelial-mesenchymal transitio,EMT)现象的影响。探索其可能存在的机制。方法1.将过表达RI的质粒pIRES2-EGFP-RI及空质粒pIRES2-EGFP分别转染人膀胱癌细胞T24后利用G418筛选阳性克隆；根据转染的质粒不同将细胞分为３组，分别命名为：T24组（未转染组）、T24Vector （转染pIRES2-EGFP质粒）和T24-RI组（转染pIRES2-EGFP-RI质粒）；RT-PCR检测T24细胞中RI的mRNA水平变化，细胞免疫荧光及Western blot检测RI蛋白的表达。2.HE染色及普通光学显微镜观察细胞形态学的改变；鬼笔环肽实验观察细胞微管的变化；流式细胞术分析各组细胞的周期变化情况；MTT检测细胞增殖情况；激光共聚焦检测RI与ILK的相互关系；细胞免疫荧光检测ILK下游信号蛋白p-Akt和p-GSK3β的表达情况。3.粘附实验，划痕实验及Transwell侵袭实验分别检测细胞粘附，迁移及侵袭的变化。Western blot检测蛋白RI, ILK及细胞侵袭相关蛋白MMP-2，MMP-9，EMT相关蛋白E-cadherin, N-cadherin,Vimentin, Snail, Slug, Twist及Cyclin-D1的表达水平。4.构建裸鼠移植瘤模型，观察移植瘤的生长情况，计算抑制率；HE染色，CD31抗体检测移植瘤中微血管的生长情况；HE染色观察肺组织癌细胞自发转移情况。组织免疫荧光检测蛋白p-Akt和p-GSK3β的表达情况；免疫组织化学检测各组瘤组织中蛋白RI,ILK, MMP-2，MMP-9，E-cadherin, N-cadherin, Vimentin, Snail, Slug,Twist的表达变化及人膀胱癌组织中RI，ILK，E-cadherin, Vimentin,Snail, Slug, Twist的表达差异；HE染色观察人膀胱癌组织中微血管的不同。结果1.T24-RI组RI的mRNA水平及蛋白表达显著升高(Ｐ＜0.05)；2.HE染色结果表明细胞铺展良好；核质比明显减小，细胞形态向间质形态变化；鬼笔环肽实验证实细胞过表达RI后，微管无序且减少，细胞由间质形态向上皮形态转变；流式细胞术表明T24-RI组细胞较两对照组S期细胞百分率升高，G1期和G2期降低；MTT实验显示T24-RI组细胞增值能力下降。RI与ILK蛋白具有共定位现象；ILK下游信号蛋白p-Akt, p-GSK3β表达降低。3.T24-RI组细胞粘附能力较T24，T24Vector组明显升高(Ｐ＜0.01)，迁移能力，侵袭能力较T24，T24Vector组明显降低(Ｐ＜0.01)。体外Western blot结果显示，T24-RI组中蛋白RI，E-cadherin较T24组，T24Vector组表达升高（Ｐ＜0.05,Ｐ＜0.01），N-cadherin,MMP-2，MMP-9, Vimentin, Snail, Slug, Twist, Cyclin-D1表达降低（Ｐ＜0.01，Ｐ＜0.01，Ｐ＜0.01，Ｐ＜0.01，Ｐ＜0.01，Ｐ＜0.01，Ｐ＜0.01，Ｐ＜0.05）。4.各组裸鼠在皮下注射相应的细胞后，T24-RI组所形成的移植瘤明显受到抑制；CD31抗体免疫荧光实验及HE染色均表明T24-RI组瘤组织中微血管明显少于两对照组；T24-RI组肺组织未见明显转移，而两对照组在血管周围均可见到细胞核增大，细胞核染色加深的细胞团，表明癌细胞向肺组织转移；组织免疫荧光实验检测到T24-RI组p-Akt和p-GSK3β蛋白表达明显降低。免疫组化表明T24-RI组瘤组织中蛋白RI, E-cadherin较两对照组表达明显升高，而蛋白ILK, MMP-2,MMP-9, N-cadherin, Vimentin, Snail, Slug, Twist表达明显降低同时检测到蛋白RI，E-cadherin在人高转移膀胱癌组织的表达明显高于人膀胱癌旁组织及人非转移性膀胱癌,而ILK,Vimentin, Snail, Slug, Twist成相反趋势变化。结论核糖核酸酶抑制因子通过ILK信号通路及EMT抑制了膀胱癌的侵袭转移。