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[目的]初步评价丝素/β-磷酸三钙(β-TCP)三层一体化高仿生支架的生物安全性,并使用该支架体外构建组织工程软骨细胞-支架复合物。[方法](1)采用改进的共混／冷冻干燥法制作三层一体化高仿生支架,其中软骨部分为100%丝素蛋白、骨部分为100%β-TCP、中间过渡层使用40%丝素蛋白和60%β-TCP共混物。(2)对该支架行大体观察,扫描电镜(SEM)检测其微观结构,初步计算其孔隙率和孔径。(3)对该支架行急性毒性试验、亚急性毒性试验、血液相容性试验、CCK-8细胞毒性试验、组织学评估等方法,以评价其生物安全性。(4)应用三层一体化高仿生支架,采用负压吸引法接种大鼠软骨细胞,体外构建组织工程软骨细胞-支架复合物。计算软骨细胞接种率和黏附率。取体外培养4周的组织工程软骨细胞-支架复合物,通过大体观察、扫描电镜(SEM)观察、组织学观察等试验对其进行检测。[结果](1)三层一体化高仿生支架直径4mm,高度10mm。软骨部分孔径150-200μm、孔隙率91.5%±2.2%,中间过渡层孔径30-50μm,孔隙率74.2%±3.8%,骨部分孔径400-500μm、孔隙率70.6%±4.2%(2)急性与亚急性毒性试验显示,动物一般情况良好,两周后血常规、体重等生理指标未有明显异常,心、肝、肾等主要脏器无明显改变。三层一体化高仿生支架溶血率为2.09%,小于5%,符合医用材料对溶血试验的要求。CCK-8细胞毒性试验证明三层一体化高仿生支架对软骨细胞无毒性。(3)采用负压吸引接种技术,最终三层一体化高仿生支架细胞接种率为81.8%,黏附率为68.3%。(4)使用支架构建组织工程软骨细胞-支架复合物,取软骨部分行番红、阿利辛蓝染色可观察到软骨细胞在支架的软骨部分中均黏附良好,均匀分布,胞外基质分泌较多。[结论]我们制作的丝素/β-TCP三层一体化高仿生支架具有良好的生物安全性,基本符合组织工程理想支架的要求。