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在真核细胞中，错误折叠或异常聚集的蛋白通常有三种命运，在分子伴侣的作用下去折叠以恢复正常结构，通过泛素-蛋白酶体系统被降解或者自噬-溶酶体系统被清除。通常情况下，泛素-蛋白酶体系统是降解错误折叠蛋白的主要途径，当其活性损伤或功能障碍时，自噬-溶酶体通路会代偿性地被激活。Poh1是裂殖酵母中Pad1在人体中的同源物，参与维持细胞活性，调节胚胎干细胞分化，促进肿瘤的形成等过程。此外，Poh1是26S蛋白酶体的一个亚基，具有去泛素化酶活性。Tau蛋白相关疾病是由于tau蛋白异常聚集而导致的一类神经退行性疾病，其典型病理学特征是出现胞内的细胞骨架结构损坏，以及在神经元及神经胶质细胞中出现含tau蛋白的聚集体。此外，这类疾病患者体内普遍存在泛素-蛋白酶体系统功能缺陷。而在蛋白酶体功能障碍时，自噬-溶酶体通路的活性将代偿性增强以清除胞内异常聚集的蛋白质。Poh1与异常聚集的蛋白质经自噬途径的降解有关。蛋白酶体活性被抑制时，Poh1缺陷可以导致蛋白质聚集体的清除障碍，而注入外源性K63连接的泛素链可促进蛋白质聚集体的清除。据此，我们推测Poh1可能通过K63连接的泛素链的介导参与异常聚集的tau蛋白的清除过程。 本研究以HEK293/tau441细胞为实验材料，采用转染Poh1 siRNA的方法下调内源性Poh1的表达水平，然后用5μM蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞24 hr，以诱导胞内含tau蛋白的聚集体的形成;之后将MG132洗脱，观察异常聚集的tau蛋白的降解过程并对其机制进行探讨。结果显示:(1)与对照组相比，Poh1 siRNA的浓度为80 nM时，内源性Poh1表达水平下降多达60％，抑制效果显著(p＜0.001)。(2) MG132处理细胞后，tau蛋白向核周聚集，vimentin显色阳性并在核周出现蛋白质聚集体形成的典型的球状聚集物。同时，tau蛋白和vimentin具有共定位关系。MG132洗脱后，tau蛋白散在分布在胞浆中，同时，蛋白质聚集体出现解聚。(3)MG132处理细胞后，tau和Poh1在近核区共定位并形成了明显的球状聚集体;MG132洗脱处理组中，tau和Poh1的聚集程度明显降低，但是二者还保持共定位关系。(4)与正常对照组比较，单纯MG132处理会导致tau含量增加(p＜0.01)，MG132洗脱后，tau含量显著减少(p＜0.001);Poh1 siRNA处理细胞后，与正常对照组比较，MG132处理后tau含量显著增加(p＜0.001)，去除MG132后，tau含量显著减少(p＜0.001)。但是与无Poh1 siRNA处理组相比，Poh1 siRNA组的MG132 wash/MG132的比值较大(p＜0.01)。(5)与正常对照组相比，单纯MG132处理会使LC3-Ⅱ表达水平上调(p＜0.01)，洗脱MG132后LC3-Ⅱ表达水平下降;Poh1 siRNA处理组细胞中，MG132处理组或MG132洗脱组中LC3-Ⅱ的表达水平均无明显改变。(6)与正常对照组比较，MG132单独处理组中，K63连接的泛素链含量明显增加(p＜0.001);洗脱MG132后，K63连接的泛素链的含量显著下降(p＜0.001)。在下调Poh1表达水平的基础上，MG132处理后，相对于正常对照组，K63连接的泛素链含量明显增加(p＜0.01)，MG132洗脱后，K63连接的泛素链含量减少(p＜0.01)。但是和MG132单独处理组相比，下调Poh1表达水平后用MG132处理，K63连接的泛素链含量明显减少(p＜0.01)。(7)与正常对照组相比，单纯MG132处理组与Poh1 siRNA和MG132同时处理组细胞中，ac-tubulin表达水平都显著下降(p＜0.001);与MG132单独处理组比较，抑制Poh1表达水平后的MG132处理组中，ac-tubulin含量无明显改变。与Poh1 siRNA非处理组的MG132洗脱组比较，抑制Poh1表达后再洗脱MG132，ac-tubulin含量增加(p＜0.01)。但是，抑制Poh1表达水平对细胞中HDAC6的含量无影响。综合上述结果可知，Poh1在tau蛋白的清除过程中发挥重要作用。Poh1通过调节K63连接的泛素链的含量，进而调节HDAC6的去乙酰化酶活性，最后激活自噬途径对tau蛋白的降解。当蛋白酶体有功能障碍时，降低内源性Poh1的表达水平会直接导致K63连接的泛素链含量的减少，进而降低HDAC6的去乙酰化酶活性以及自噬活性，最终使tau蛋白的清除过程受阻而引起胞内tau蛋白积累。本研究初步探索了Poh1在tau蛋白聚集体清除过程中的作用及相关机制，为tau蛋白相关疾病的靶向治疗提供了可靠的实验依据。