【摘 要】
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染料探针是目前应用广泛、种类较多的光谱探针,已被用于蛋白质、核酸等生物分子的定量分析.其机理方面的研究对生命科学和分析化学都具有重大的意义.该文以茜素红S(ARS)作为
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染料探针是目前应用广泛、种类较多的光谱探针,已被用于蛋白质、核酸等生物分子的定量分析.其机理方面的研究对生命科学和分析化学都具有重大的意义.该文以茜素红S(ARS)作为光谱探针,分别利用紫外-可见光光度法和荧光猝灭法研究了其与5-核苷酸分子间的作用,在此基础上建立了测定5-核苷酸的方法,确定了体系反应的最佳条件,对ARS与5-核苷酸分子间的作用机理作了一定的研究,旨在了解和解释ARS与生物小分子间的相互作用,为选择和建立新的分析方法提供理论依据.该论文分为四部分:第一部分:利用紫外-可见光谱研究了ARS与5-核苷酸的相互作用.在Tris-HCl缓冲溶液中(pH=4.6),ARS与5-核苷酸生成红色的配合物,与试剂比较,配合物的最大吸收峰红移90nm,其吸光度与5-核苷酸浓度成线性关系,据此建立了该方法的最佳反应条件.通过正常人血清样品的标准加入回收实验,结果令人满意.第二部分:在上述工作的基础上,对Cu<2+>、ARS与5-核苷酸三元体系的紫外-可见光谱进行了研究.在弱酸性Tris-HCl缓冲溶液中,ARS与Cu<2+>和5-核苷酸结合形成的三元络合物,其吸光度与5-核苷酸浓度呈线性关系,线性范围为0~30mg/L.该体系稳定,温度、时间和离子强度均无较大影响.通过正常人血清样品的标准加入回收实验,结果令人满意.第三部分:主要研究了5-核苷酸对ARS的荧光猝灭作用.在Tris-HCl缓冲溶液中(pH=3.8),其猝灭程度与5-核苷酸的浓度呈线性关系,据此建立了利用荧光猝灭法测定5-核苷酸的方法,获得体系的最佳反应条件.正常人血清样品的标准加入实验结果令人满意.第四部分:对上述实验的机理进行了探讨,其中静电引力是促使ARS平衡发生移动并引起颜色变化的主要作用力.通过标准工作曲线,计算出配合物的结合比和条件结合常数,分别利用等摩尔比法和荧光猝灭法计算了体系作用的稳定常数.
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