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目的： 1、研究人正常乳腺上皮细胞（MCF-10A）合成的硫酸乙酰肝素（heparan sulfate, HS）和不同分子量肝素（Heparin, HP）对乳腺癌细胞增殖能力的影响。 2、研究HPs和HS对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的影响。 3、探讨HPs和HS对乳腺癌细胞中基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinases, MMPs）与肝素酶（heparanase，HSPE）表达的影响。 4、检测不同乙酰化程度的低分子量肝素（Low molecular-weight-heparin, LMWH）对乳腺癌细胞增殖活性的影响。 方法： 1、提取MCF-10A细胞汇合期培养液中的HS链，以浓度100、200、400、800、1600 mg·L-1的HS和三种分子量的HPs（UFH（12.5KD）、LMWH-A（<8KD） and LMWH-B（3.5～5.5KD））以浓度312.5、625、1250、2500、5000 ug·L-1作用于MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞24、48、72小时后采用MTT比色法，检测细胞活性。并据此实验计算HS和HPs的IC50。 2、以乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞为研究对象，使用Transwell法明确 HS和 HPs对三株细胞的侵袭能力以及迁移力的影响；细胞划痕实验观察细胞的迁移能力。 3、以乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞为对象，用 HS和 HPs处理24h后， Western blot检测MMP-2和MMP-9的表达；同上处理细胞，ELISA检测HPs和HS对乳腺癌细胞肝素酶活性表达的影响。 4、MTT比色法检测不同乙酰化程度的LMWHs对乳腺癌细胞增殖活性的影响。 结果： 一、HS和HPs对乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞的增殖抑制 作用 MTT法结果显示，HS和HPs均能抑制三种乳腺癌细胞的增殖活性，其抑制活性随着作用时间和浓度的增加也随之增加。HPs和HS的最高浓度作用于MCF-7细胞对细胞的抑制活性强度是HS>LMWH-B>LMWH-A>UFH，且HS组与HPs组的抑制率相比，有显著性差异（p<0.05）；HPs和HS的最高浓度作用于MDA-MB-231和MDA-MB-435细胞的增殖抑制活性同样是HS>LMWH-B>LMWH-A>UFH，且HS组与HPs组的抑制率相比，有显著性差异（p<0.05）。 二、HS和HPs对乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞的侵袭转移能力的影响 1、HS和 HPs可以使 Transwell侵袭模型中乳腺癌 MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞侵入滤膜的细胞数减少，且与对照组相比均有显著差异(p<0.01)；使侵袭细胞数目减少的程度为 HS>LMWH-B>LMWH-A>UFH，且 HS与HPs相比也有显著差异（p<0.05）。 2、HS和 HPs可以使 Transwell转移模型中乳腺癌 MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞侵入滤膜的细胞数减少，且与对照组相比均有显著差异（p<0.01）；使转移细胞数目减少的程度为HS>LMWH-B>LMWH-A>UFH，且HS与HPs相比也有显著差异（p<0.05）。 3、在划痕并给药0h的时候各组划痕边缘清晰，划痕区域无迁移细胞；24h后各组有不同程度的愈合，划痕区域迁移入部分细胞；在给药48h后，对照组划痕几乎愈合，而HPs和HS的划痕愈合程度为HS0.05）； NO.3、NO.4乙酰化产物对MCF-7细胞的增殖抑制作用增强（p<0.05）。 结论： 1、HPs和HS对乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞具有抑制作用，且这一作用的强度为HS>LMWH-B>LMWH-A>UFH，HPs和HS对肿瘤细胞的增殖抑制作用有助于抑制肿瘤细胞的生长。 2、HPs和HS具有抑制乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞侵袭和转移活性的作用，且这一作用的强度为HS>LMWH-B>LMWH-A>UFH。 3、HPs和HS对乳腺癌MCF-7、MDA-MB-435细胞中MMP-2、MMP-9具有显著的抑制作用且作用强度为HS>LMWH-B>LMWH-A>UFH。对MMP-2、MMP-9蛋白的抑制作用可以抑制肿瘤细胞的侵袭活性，这可能是 HPs和 HS具有抑制肿瘤细胞侵袭活性的原因之一，而对于 MMP-2、MMP-9不同的抑制程度可能是构成HPs和HS对侵袭抑制能力强弱不同的机制之一。 4、HPs和HS对乳腺癌MCF-7、MDA-MB-435细胞中HSPE表达具有显著的抑制作用且作用强度为HS>LMWH-B>LMWH-A>UFH。HSPE活性的降低使得细胞外基质的屏障固化，从而减少了肿瘤细胞的侵袭和转移。HSPE活性降低的不同程度可能是造成HPs和HS对侵袭抑制能力强弱不同原因之一。 5、对 LMWH进行不同乙酰化程度改造获得的化合物使其抗肿瘤增殖活性升高、无显著变化或活性降低说明乙酰化程度在一定程度上影响着肝素类化合物对肿瘤细胞的增殖抑制活性。