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虹彩病毒(iridovirus)属于核质大DNA病毒(NCLDV)，宿主范围广、危害严重，对水产养殖和野生动物保护造成了巨大的影响。其中，蛙病毒属病毒可以感染多种鱼类、两栖类和爬行类动物，其引发的疾病在全球范围均有报道。本论文以沼泽绿牛蛙病毒，简称蛙病毒（Rana grylio virus，RGV）为研究对象，构建出双荧光标记的重组病毒ΔDUT,TK-RGV，并检测了病毒基因的缺失和外源基因的插入对病毒复制的影响。此外，对虹彩病毒核心基因RGV13L进行了初步的鉴定分析。主要结果如下: 1.重组蛙病毒ΔDUT, TK-RGV的构建:通过重组质粒pGL3-p50-EGFP-67R与野生型病毒RGV基因组间的同源重组，将外源基因p50-EGFP插入到尿嘧啶脱氧核糖核苷三磷酸酶(dUTPase，67R)基因位点。以绿色荧光作为筛选标志，经十轮噬斑分离，构建出单基因缺陷型重组病毒Δ67R-RGV。在此基础上，继续缺失胸苷激酶(TK)基因，构建出双荧光标记的重组病毒ΔDUT, TK-RGV。重组病毒ΔDUT, TK-RGV可以在EPC细胞中正常复制，并产生有感染性的子代病毒。在病毒ΔDUT, TK-RGV感染的EPC细胞中，可以检测到绿色和红色荧光，并且绿、红色荧光与噬斑完全重合。经PCR检测，外源基因p50-EGFP和pICP18-RFP分别按预期插入到病毒基因组的67R和TK基因位点。进一步测定RGV，Δ67R-RGV和ΔDUT, TK-RGV的一步生长曲线和多步生长曲线，结果表明这三株病毒的生长曲线均类似，无明显差别。这些结果表明，RGV67R和TK基因的缺失，以及外源基因片段p50-EGFP和pICP18-RFP的插入，对病毒的复制并无明显影响。此外，RGV67R和TK基因位点，可同时用于外源基因的表达，这将为重组虹彩病毒的构建提供新的思路。 2.RGV13L基因的鉴定分析:设计特异性引物，扩增出全长894bp的13L基因。对13L及其同源蛋白进行多序列比对，结果表明13L在虹彩病毒中普遍存在，并在蛙病毒属中有较高的相似性。对RGV13L进行原核表达后，融合蛋白13L-His主要以包涵体形式存在于菌体沉淀，病毒表达的13L蛋白相对分子质量约32.7kDa。RGV感染EPC细胞后2h，便检测到13L基因的转录。在病毒感染后8h，可以检测到13L蛋白的表达。对RGV13L的亚细胞定位进行分析，结果表明13L主要定位于宿主的细胞核，而且其它病毒蛋白的表达并不影响13L的定位。