类风湿关节炎中医证型判别函数效果评价及基因表达的初步探讨

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目的:本论文进行类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)中医证型判别函数效果评价及基因表达的初步探讨,研究目的如下:第一、在前期建立RA中医代表证型—湿热痹阻型、肝肾两虚型和寒热错杂型判别函数并进行组内回代(回顾性考核)研究的基础上,通过进一步收集病例,进行组外回代(前瞻性考核)研究,计算误判概率,更好的考察该判别函数的判别效果,为RA中医辨证客观化研究提供依据。第二、以正常健康人作为对照,获得RA三种中医代表证型—湿热痹阻型、肝肾两虚型、寒热错杂型患者外周血单个核细胞(Peripheral Blood MononuclearCells,PBMC)的基因表达特征,通过有效数据的筛选和相关基因表达的分析,初步探讨RA患者与正常健康人、以及RA患者不同中医证型间基因表达的共同性和差异性,为进一步在分子生物学水平上研究RA提供依据。方法:包括RA判别函数效果评价和基因表达分析,具体如下:第一、收集111例RA患者,按照相关的中医诊断标准,分别诊断为肝肾两虚、湿热痹阻、寒热错杂三种证型。将这111例RA患者各分类的赋值变量分别代入前期已建立的各证型的线性判别函数式中,三个判别函数式的最大值为该患者的证型归类。对照原始辨证分型的分类和判别函数所判的分类,计算误判概率。第二、取正常健康人一例和RA中医代表证型—湿热痹阻型、肝肾两虚型、寒热错杂型患者各一例的外周血,经淋巴细胞分离液分离得到四个标本的单个核细胞,再依次进行总RNA提取和纯化、cDNA的合成和纯化、cRNA的合成和纯化、cRNA的片段化、配制杂交液、芯片杂交、扫描芯片、洗脱芯片,芯片质控和数据分析,得到四个标本的基因表达谱。初步探讨RA患者与正常健康人、以及RA患者不同中医证型间PBMC基因表达的共同性和差异性。结果:包括RA判别函数效果评价及基因表达分析两方面的结果,具体如下:第一、根据判别函数,对所收集的111例RA患者观测量所属类别进行判别检验,对比原始分类和判别函数所判的分类,误判概率分别是18.40%、9.43%、10.00%(均小于20%),符合率分别为81.60%、90.57%、90.00%。证明此判别函数具有较好的判别效果,对RA中医证型的诊断具有较高的参考价值,可在临床研究中加以应用。第二、基因芯片扫描数据分析发现:湿热痹阻型RA患者与正常健康人相比,有123条基因异常表达,其中93个上调,30个下调。肝肾两虚型RA患者与正常人相比,有102条基因异常表达,其中37个上调,65个下调。寒热错杂型RA患者与正常人相比,有139条基因异常表达,其中97个上调,42个下调。为了综合考察RA患者不同中医证型与正常健康人之间的基因表达差异,对三组之间的差异基因进行了综合比较,结果显示,有11条基因在三组之间均存在着明显差异。结论:通过对RA中医证型判别函数效果评价研究及基因表达的初步探讨,本论文得出的结论如下:第一、将中医宏观辨证分型采用统计学概率论方法,依据有关医学理论,将症状、体征等量化,从而建立各证型的判别函数,得到的判别函数通过回顾性考核和前瞻性考核,均显示了较低的误判概率(<20%),表明该判别函数具有较好的判别效果。第二、RA患者与正常健康人之间的基因表达存在着差异,这些差异基因富集功能主要涉及免疫应答,还涉及信号转导和细胞功能方面。RA患者不同中医证型之间存在着基因表达差异,这些基因在富集功能上除了涉及到免疫反应方面,更多的涉及到细胞增生分化、细胞凋亡、细胞转录翻译、细胞成分构成,表明RA患者不同中医证型之间不仅存在着免疫反应程度的差异,还存在着免疫反应以外的差异。
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