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目的:
检测并分析MMP10基因及其蛋白在早孕小鼠子宫内膜组织中的表达及分布规律,探讨其作用机理,为探索胚泡着床机制提供实验基础和理论依据。
方法:
1、建立妊娠3、4、5、6、7天NIH小鼠模型,分别记为d3、d4、d5、d6、d7。收集d3、d4、d5、d6、d7小鼠子宫内膜,以未孕鼠(d0)子宫内膜作对照;
2、采用RT-PCR和原位杂交技术测定MMP10mRNA在不同孕期小鼠子宫内膜组织中的表达水平;
3、采用Western blotting和免疫组织化学法检测MMP10蛋白在不同孕期小鼠子宫内膜组织中的表达水平。
结果:
1、MMP10基因和蛋白在未孕和早孕小鼠的子宫内膜组织均有表达,早孕组显著高于未孕组。(P<0.05)2、RT-PCR目的基因扩增片段大小与预期值(210bp)相同,MMP10mRNA在早孕组中的表达较未孕组显着增加(P<0.05),且表达量从着床前期到着床后期逐渐增强,其中d6、d7表达最强,与其它妊娠各期比较差异有统计学意义(P<0.05)。 3、原位杂交显示结果与 RT-PCR 结果基本一致。杂交阳性信号主要定位于间质细胞的胞浆中,为紫蓝色细砂样至黑紫色粗颗粒状。
4、IHC显示MMP10在早孕组中的表达较未孕组显着增加(P<0.05),且表达量从着床前期到着床后期逐渐增强,其中d6、d7表达最强,与其它妊娠各期比较差异有统计学意义(P<0.05)。MMP10在间质细胞、腺上皮细胞和腔上皮细胞胞浆内均可见棕黄色颗粒沉着,但主要分布在间质细胞,且以胞浆分布较多,胞核也可见。
5、western blotting结果与IHC结果基本一致。
结论
MMP10基因及蛋白在早孕小鼠子宫内膜组织中动态表达规律及其在子宫内膜的分布变化提示MMP10高表达可能有利于降解细胞外基质,促进胚胎滋养细胞的侵袭,它参与了着床中子宫内膜的蜕膜化过程以及胚胎的早期增殖与分化。