女性生殖系统疾病诊断方法与辅助生殖技术方法的研究

来源 :华东理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lfq198410
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肿瘤和不育是女性生殖系统常见的疾病。肿瘤的治疗首先需要有效的筛查手段;不育的治疗主要有药物和手术治疗,包括试管婴儿;因此肿瘤筛查和显微操作是女性生殖系统疾病诊疗的关键技术。   在妇科肿瘤中,卵巢癌因发病隐匿,其死亡率居于首位,鉴于国内一直沿用的血清肿瘤标志物CA-125对早期卵巢癌的阳性预测率较低,我们现选择早期卵巢癌阳性预测率较高、且国外已用于卵巢癌早期筛选的人附睾分泌蛋白4为标志物,采用全基因合成法获得HE4基因片段,通过亚克隆得到原核重组表达载体PRset-C-HE4、真核重组表达载体pEGFP-N1-HE4,并构建了重组腺病毒Adeno-X-HE4。经条件优化后,获得由上述三种途径表达的HE4重组蛋白,经免疫学鉴定确认后,选择真核表达的蛋白通过亲和层析法进行纯化,得到了纯度较高的HE4蛋白,可用于制备HE4诊断用抗体,为开发肿瘤标志物HE4早期诊断卵巢癌试剂盒奠定了基础。   卵胞浆内单精子注射技术(ICSI)是女性不孕不育辅助生殖治疗的革命性突破,而影响该显微操作成功率的一个重要因素是缺少一种对精子预处理的有效方法,本文以ICR小鼠为研究对象,用低浓度碱溶液处理小鼠精子,借助流式细胞仪分析精子DNA的损伤情况。通过对NaOH浓度、与精子作用的温度和时间等条件的探索,结果发现用10mmol/L的NaOH溶液在0℃下与精子孵育2h,可在不损伤精子DNA的情况下,使头尾分离的效率达到55%,这为临床上显微操作前对精子进行处理提供了一种简单易行的新方法。
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