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膝骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是一种以关节软骨的变性、破坏及骨质增生为特征的慢性关节病。被认为是全球发病率最常见的一种疾病。年龄、肥胖、炎症、创伤及遗传因素等可能与本病的发生有关,其根本是膝关节内及周围组织的退行性病变,包括周围肌肉肌力的下降、韧带的松弛、滑囊炎、滑膜炎、软骨病变及半月板病变等。第一,基础方面,目前研究的热点是滑膜的退变及软骨的退变,较为公认的机制是滑膜固有免疫应答(非特异性免疫)激活OA滑膜炎症反应,比如我们课题组前期的研究表明:不同程度OA病变滑膜炎症与TLRs、NF-κB的表达之间存在显著的相关性,但是有研究表明T细胞介导的特异性免疫应该同样参与膝OA的发生发展过程,但是目前还没有基础实验的理论数据支持。所以我们提出以下假说:膝OA以非特异性免疫为主体,有特异性免疫存在,二者相互影响,调节膝OA的发病与发展。基于此假说,我们从分子研究共刺激分子CD28、CD14的表达来做初步探索。第二,在临床方面,膝OA的主要病理变化,主要表现为膝关节滑膜和半月板退变等,运用中医外治法具有优势。中医外治法的定义为手法或器械将药物施于体表,从体外进行治疗的方法,包括针灸、推拿、针刀、中药外用等方法。我们创新性的联合应用肌骨超声引导下针刀结合超声药物促透通络止痛凝胶贴剂两种中医外治法,阐述其临床疗效。进一步论证中医外治法治疗膝OA的优势。目的:1.从临床和基础两个方面,临床上联合应用肌骨超声引导下针刀结合超声药物促透通络止痛凝胶贴剂两种中医外治法干预早中期膝OA,通过分析膝骨关节炎的主要病理变化滑膜病变、半月板病变及其与临床症状之间的关系,总结分析中医外治法治疗膝OA的临床疗效。基础研究方面应用中医外治法(通络止痛方)作为干预手段,从免疫学方面初步探索膝关节可能存在的发病机制;2.创新性的将传统的中医外治法结合超声技术,为膝OA这一中老年常见疾病的中医精准治疗提供新方法,并进一步继承和发展传统中医外治法。方法:基础研究:1.将膝OA大鼠模型滑膜细胞做体外培养,应用经脂多糖激动后的高、中、低不同浓度通络止痛方中药干预后,与脂多糖对照组比较,运用流式细胞术检测滑膜细胞凋亡情况,分析统计通络止痛方中药干预滑膜凋亡的影响;2.将关节镜取出的人滑膜细胞进行细胞培养传代,应用经脂多糖激动后的高、中、低不同浓度通络止痛方中药干预后,与脂多糖对照组比较,运用流式细胞术观察干预前后CD28、CD14的表达情况。临床研究:1.膝0A根据干预手段随机分为三组,即A组(联用中医外治法):肌骨超声引导下针刀+超声透入通络止痛方凝胶制剂组;B组(单用中医外治法):超声透入通络止痛方凝胶制剂组;C组(对照组):关节穿刺医用几丁糖+NASIDs 口服组。收集膝OA肌骨超声下病理表现、治疗前后各节点Lysholm评分及VAS评分。2.将肌骨超声下主要病理变化即滑膜病变、半月板病变、关节积液等做相关性分析,探索膝OA各病变之间的关系;分析膝OA主要病理改变即滑膜病变、半月板病变、关节积液等与Lysholm评分、VAS评分的相关性,探讨其对膝0A症状表现的影响;3.分析A、B、C三组临床疗效,比较之间的差异。结果:基础研究:1.高浓度通络止痛方组与对照组比较,P<O.05,差异具有统计学意义。中、低浓度组与对照组比较,P=0.51>0.05,差异无统计学意义。说明高浓度通络止痛方能促进滑膜细胞凋亡。2.各组加通络止痛方后信号启动,CD14及CD28表达均增多,CD14及CD28免疫应答均具有浓度依耐性,与对照组比较,P<0.05,差异具有统计学意义。临床研究:1.研究关节积液量与半月板病变的相关性,通过多重回归分析,以半月板病变为自变量,拟定回归方程 y=0.195x+0.341,R=0.105,F=1.468,P=0.228,以P<0.01为差异有统计学意义,结果显示关节积液量与半月板病变无明显相关性;研究滑膜增生与半月板病变的相关性,通过多重回归分析,以半月板病变为变量,拟定回归方程:y=0.409x+0.06,R=0.372,F=21.155,P=0.000。以 P<0.01 为差异有统计学意义,结果显示滑膜增生与半月板病变具有低度相关性;2.三组治疗前后Lysholm、VAS评分及半月板膨出距离(A组33例、B组30例、C组共36例,三组病例总共99例,如治疗后半月板膨出消失,数值记为0,治疗前后共198组数据)分别行重复测量资料的单因素方差分析,P<0.01,具有统计学意义,说明半月板膨出距离和Lysholm、VAS评分之间具有相关性。3.三组治疗前后Lysholm、VAS评分及关节积液量(A组31例、B组28例、C组共29例,三组病例总共88例,如治疗后积液后消失,数值记为0,治疗前后共176组数据)分别行重复测量资料的单因素方差分析,P<0.01,具有统计学意义。说明关节积液量(髌上囊积液)和Lysholm、VAS评分之间具有相关性。4.三组治疗后1月Lysholm评分评分组间比较,P>0.01,差异没有统计学意义,说明A、B、C三组均可以改善患者的生活质量。三组治疗后1月VAS评分评分组间比较,P<0.01,差异具有统计学意义,说明三组在改善患者疼痛方面具有差异。A组与B组行配对样本t检验,Lysholm评分,t=2.26,P=0.045>0.01,差异没有统计学意义;VAS评分,t=1.98,P=0.037>0.01,差异没有统计学意义。A组与C组行配对样本t检验,Lysholm评分,t=5.57,P=0.008<00.01,差异有统计学意义;VAS评分,t=6.218,P=0.0025<0.01,差异有统计学意义。B组与C行配对样本t检验,Lysholm 评分,t=6.29,P=0.00<00.01,差异有统计学意义;VAS 评分,t=3.42,P=0.0015<0.01,差异有统计学意义。结论:1.通络止痛方能够促进大鼠OA模型滑膜细胞的凋亡,2.人滑膜培养细胞应用通络止痛方后CD14、CD28信号启动,说明CD14、CD28参与了 0A的免疫应答,初步说明,T细胞介导的特异性免疫应答可能参与了 0A发病及进展。3.中医外治法治疗膝0A的疗效确切,且联用两种中医外治法,即针刀联用超声透入通络止痛凝胶贴片,效果值得肯定,推荐广泛使用;4.膝OA的主要病理表现如滑膜炎、半月板病变与VAS评分、Lysholm评分之间具有相关性,应用中医外治法对于滑膜炎、半月板病变的治疗,可以改善患者的临床症状,;5.在传统针刀的基础上,应用肌骨超声引导下行针刀治疗,具有安全性高,改善率高的优点,具有创新性。