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副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，HPs）是猪革拉瑟氏病（Glassers病）的病原体，属于巴斯德氏杆菌科嗜血杆菌属，是猪上呼吸道的一种常住菌，当遭遇应激条件时，便容易爆发此病，可以引起猪纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎。HPs只感染猪，通常感染2周龄到4月龄的猪只，发病率一般在10％～15%，死亡率可达50%。副猪嗜血杆菌通常与其他病原体混合感染，使疫情更加复杂化，给经济带来严重损失。如今，已发现副猪嗜血杆菌至少有15个血清型。在我国，以血清4型最为流行，血清5型毒力最强，血清13型也较为流行。
外膜蛋白A（Outer Membrane Protein，OmpA）是革兰氏阴性菌外膜蛋白中的主要成分并且高度保守。副猪嗜血杆菌外膜蛋白OmpA具有较强的免疫原性，是制备检测抗体的良好抗原。本研究第一部分分析和预测副猪嗜血杆菌血清4型OmpA抗原表位，并对抗原表位基因进行重组、表达和多肽纯化。我们采用生物信息学软件DNAStar对OmpA的二级结构、表面特性及抗原表位等进行分析。结果显示，OmpA胞外区的抗原表位主要分布于氨基酸残基40aa～61aa、94aa～108aa、138aa～148aa及193aa～214aa。串联重组这四段抗原表位基因片段，并对其密码子进行大肠杆菌密码子偏嗜性改造，人工合成改造后的基因片段，将其插入pET-32a，构建重组表达载体pET-pA。将重组表达载体pET-pA转化大肠杆菌BL21(DE3)，确定最佳诱导表达条件为：37℃250r/min振荡培养至OD600约为0.6，加入终浓度为1.0mmol/L的IPTG，28℃诱导4h。对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blotting分析，结果表明，重组蛋白为理论设计蛋白。该重组蛋白为制备副猪嗜血杆菌单克隆抗体提供基础。
第二部分以获得的pA蛋白为抗原制备单克隆抗体。用纯化的pA蛋白免疫BALB/c小鼠，100μg/只，三免后采血。用间接ELISA方法检测小鼠血清抗体效价。选择血清抗体效价最高的BALB/c小鼠加强免疫，3d后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。用HAT培养基对杂交瘤细胞进行培养，第10d取所有细胞孔上清进行间接ELISA检测。采用有限稀释法对阳性孔细胞进行亚克隆，重复3次，得到两株稳定分泌单克隆抗体的细胞株：1D12、6F8。及时冻存杂交瘤细胞株，并进行腹水制备，测得腹水单克隆抗体效价可达1:200000以上。通过特异性试验检测，所得单抗具有良好的特异性。