氧化应激状态下大鼠海马N-Shc蛋白功能改变的探讨

来源 :浙江大学医学院 浙江大学医学部 浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:joeyifeng
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目的:研究大鼠N-Shc蛋白的表达,以及经H2O2刺激后不同时间点大鼠海马N-Shc蛋白的磷酸化水平改变,和不同浓度H2O2刺激后大鼠海马N-Shc蛋白与PKCδ蛋白的磷酸化水平以及两者结合的改变,探讨氧化应激对大鼠海马N-Shc蛋白功能的影响。方法:运用免疫印迹技术,检测:①Shc家族蛋白在大鼠神经系统及其它系统中的表达;②N-Shc和PKCδ蛋白在不同月龄大鼠全脑中的表达;③H2O2刺激后不同时间点大鼠海马N-Shc蛋白的磷酸化水平改变;④不同浓度H2O2刺激后大鼠海马N-Shc蛋白与PKCδ蛋白的磷酸化水平以及两者结合的改变。所得数据以正常对照的单位密度值为标准进行校正,用SPSS forwindows 13.0软件进行单因素方差分析。结果:大鼠N-Shc蛋白的表达集中在神经系统,在心脏、肝脏和肌肉等组织中几乎没有表达;大脑N-Shc蛋白在孕12.5天和孕15.5天仅有少量表达,在出生后表达量明显增多,而PKCδ蛋白在大鼠大脑的各个发育时期都有表达;H2O2刺激后,大鼠海马N-Shc蛋白的磷酸化水平在5 min内快速上升,并一直持续到30 min;不同浓度H2O2刺激后,N-Shc蛋白和PKCδ蛋白的磷酸化水平出现逐渐升高,H2O2浓度5mM组和对照组之间具有显著性差异(P<0.01);不同浓度H2O2刺激后,N-Shc蛋白和PKCδ蛋白的结合明显增加,其结合量随H2O2浓度的升高而增加,5mM H2O2刺激组和对照组之间具有显著性差异(P<0.05)。结论:大鼠海马组织中的N-Shc蛋白,经H2O2刺激后引起磷酸化改变,并存在刺激时间和刺激浓度的依从性;同时,H2O2刺激可以促进N-Shc蛋白和PKCδ蛋白的结合,并且二者的结合量随H2O2浓度的升高而增加。提示,氧化应激状态下N-Shc蛋白功能的改变,有可能对抑制细胞凋亡具有积极的作用。
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