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对青岛近海海水中琼胶降解细菌进行了系统的分离,筛选得到87株海洋琼胶降解细菌。从中选出15株有代表性的菌株,克隆其16SrDNA序列,进行分子鉴定。结果表明,这些细菌主要分布在Cellulophaga, Cytophaga, Microbulbifer, Glaciecola, Pseudoalteromonas, Pseudomonas, Alteromonas和Agarivorans共8个属中。其中QM5, QM21, QM36鉴定为Cellulophaga lytica , QM15和QM28鉴定为Glaciecola mesophila, QM11, QM35, QM47, QM65分别鉴定为Cytophaga fucicola, Pseudoalteromonas atlantica, Pseudoalteromonas haloplanktis, Alteromonas addita。其余5株菌能够鉴定到属的水平。对细菌QM42和DH166的鉴定结果表明,这两株细菌都是革兰氏阴性的杆状细菌,生长需要NaCl,说明它们都是海洋细菌。QM42细胞宽度为0.6-0.7μm,长度为1.5-2.5μm,不产生芽孢。它能够产生氨肽酶、氧化酶和接触酶,并且能够利用下列糖类产酸:葡萄糖、木糖、乳糖和纤维二糖。细菌DH166是从东海中部海区50米深度的水样中分离到的一株海洋细菌。其生长对于营养条件的要求比较苛刻,培养基中没有丰富的有机物,它不能够生长。在1%和6%的NaCl含量的条件下都不能生长。对这两株细菌进行了脂肪酸分析和16SrDNA序列分析。初步鉴定QM42属于一个潜在的新种,而且可能是一个新属,与Marinobacter,Microbulbifer和Alcanivorax等属相近。细菌DH166属于Pseudoalteromonas属的一个潜在的新种。对细菌QM38进行了进一步的研究。通过形态观察,生理生化特征鉴定以及16SrDNA序列分析,鉴定细菌QM38为Agarivorans albus。初步研究了细菌QM38琼胶酶摇瓶发酵的条件,对其产生的琼胶酶粗酶液进行了分析,研究了底物浓度和pH对酶活力的影响并分析了其酶解产物。根据已经发表的其他细菌的琼胶酶的基因序列设计引物,从Agarivorans albus QM38的基因组DNA中克隆得到了三条编码琼胶酶的基因agaD01、agaD02和agaD03,并进行了测序。其中两条基因,agaD02和agaD03在Agarivorans属的细菌中是首次被克隆和测序。agaD01和agaD02在GenBank中的收录号分别为EF051475和EF199908。序列分析的结果表明,在GenBank数据库中,共有三条序列与agaD01有相似性,分别是来自弧菌JT0107编码β-琼胶酶的agaA基因,序列号为D14721,相似性有97.8%;Agarivorans sp. JA-1编码β-琼胶酶的基因,序列号为EF100136,相似性有98.9%;Agarivorans sp. JAMB-A11编码琼胶酶agaA11的基因,序列号为EF100136,相似性有98.2%。和其他序列则基本上没有相似性。与agaD02有相似性的只有一条序列,就是弧菌JT0107编码β-琼胶酶的agaB基因,序列号为D21202。这两条基因相似性有98.8%。在GenBank数据库中,只有两条序列与agaD03有相似性,一条是弧菌PO-303编码β-琼胶酶agarase-c的基因,序列号为AB218419,这两条基因相似性有96.8%。另外一条是Pseudoalteromonas sp. CY24编码胞外琼胶酶的基因,序列号为AY293310,这两条基因相似性有96.5%。但是agaD03和数据库中的其他基因基本上没有任何的同源性。对agaD01和agaD02编码的蛋白质产物进行了生物信息学分析,结果显示,对这两个蛋白及其同源蛋白的结构和功能的研究很少,如果能进行结构与功能的研究,得到其催化特性,将能够获得许多新的数据与材料。设计带有酶切位点的引物扩增细菌QM38的agaD02基因,产物克隆到载体pMD19-T Simple,经过酶切及测序验证后,将此基因亚克隆到原核表达载体pET24a,构建表达载体pET24a- agaD02,转化大肠杆菌BL21,提取质粒,双酶切进行验证。利用IPTG诱导表达,通过对诱导表达后的菌落进行碘液染色,发现有透明区域,证明表达成功而且有琼胶酶分泌到细胞外。利用硫酸铵沉淀、分子筛层析和离子交换层析等方法,从Agarivorans albus QM38的培养液上清中分离纯化出一个琼胶酶组分。经SDS-PAGE电泳显示为单一条带,测定其分子量为44.2kD。根据其分子量推断,此琼胶酶组分可能是agaD03基因的编码产物。