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移植前交叉配型实验(Crossmatch)可针对性地检测肾移植受者血清中是否存在特异性抗供者HLA的同种抗体，是PRA和HLA分型实验所不能替代的移植免疫学实验，被认为是肾移植中临床意义最重要的组织配型实验。提高交叉配型实验的准确性和灵敏度对于预测肾移植后排斥反应的发生、改善肾移植近期/远期效果非常有价值。本研究旨在建立一种新的基于流式细胞技术的补体依赖淋巴细胞毒交叉配型实验(Flowcytometrycomplement-dependentcytotoxicitycrossmatch，Flow-CDC)，并明确其与临床肾移植后排斥反应的相关性。
本课题研究分为两部分：第一部分流式细胞技术-补体依赖淋巴细胞毒交叉配型(Flow-CDC)实验方法学研究
目的：为了提高识别抗供者HLA抗体的敏感性和准确性，建立Flow-CDC实验
方法，并将新的Flow-CDC与传统的NIH-CDC进行方法学比较。方法：采用荧光标记的特异性抗补体单克隆抗体以结合补体依赖的HLA抗体，已知的阴性对照血清用于确定Flow-CDC的阴性阈值，用正交设计方差分析方法确定Flow-CDC的最佳实验条件，在BeckmanCoulterEpicsXL型流式细胞仪上进行数据采集分析。等待肾移植受者的血清96例分别与相应供者淋巴细胞69份同步进行了Flow-CDC和NIH-CDC实验并比较两方法的差异。
结果：本研究建立了重复性稳定的Flow-CDC实验技术，以1.25×105供者淋巴细胞与预处理后受者血清25μ进行孵育，抗原抗体结合物经FITC-抗Clq单抗染色后即行数据采集和分析，40分钟可以完成实验全过程。研究发现，96例肾移植受者的Flow-CDC阳性率27.8％(42/151)与NIH-CDC阳性率17.2％(26/151)之间的差异呈显著性(x2=14.06，P＜0.001)。其中，在32例PRA阴性受者中Flow-CDC和NIH-CDC的吻合率为100％；在64例PRA阳性受者中，Flow-CDC和NIH-CDC吻合率为85.3％。
结论：Flow-CDC可准确识别补体依赖的抗供者HLAIgG类型抗体，灵敏度高于NIH-CDC实验。Flow-CDC实验不受淋巴细胞活力的影响，实现了电子化、程序化、标准化，可重复性好，不同实验者间的结果差异很小；具有快速、客观、可进行全程质量控制等优点，是一种值得推荐的组织配型新方法。
第二部分 Flow-CDC与临床肾脏移植后排斥反应的相关性研究
目的：研究Flow-CDC与临床肾脏移植后排斥反应的相关性。
材料与方法：34例接受同种异体肾移植受者的血清分别与相应供者细胞进行了移植前Flow-CDC实验，并观察受者肾移植后早期排斥反应发生情况。
结果：20例接受了NIH-CDC和Flow-CDC均阴性供肾的PRA阴性受者中，19例未发生移植后排斥反应，移植肾功能迅速恢复，仅1例出现移植后早期急性排斥反应经治疗后迅速逆转；此组受者移植后2个月人/肾存活率均为100％。13例接受NIH-CDC和Flow-CDC均阴性的供肾的致敏受者中，12例移植后无排斥，移植肾功能良好，1例发生移植后急性排斥反应经激素治疗后好转。1例接受了NIH-CDC阴性而Flow-CDC阳性供肾的PRA阳性再次移植受者，移植后早期发生加速排斥反应丧失移植肾。PRA阳性受者的移植后2个月受者存活率为100％，移植肾存活率为92.9％。
结论：移植前Flow-CDC阳性对移植后早期排斥反应有预测作用；Flow-CDC对于致敏受者选择合适供者更有价值；移植后Flow-CDC对术后早期排斥反应有诊断和鉴别诊断价值。Flow-CDC将会替代NIH-CDC成为移植前交叉配型标准技术。