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重组核受体酵母已经成为检测不同受体介导的内分泌干扰物的常用工具。目前有效的体外筛选技术只涉及到类固醇激素受体中的雌激素、雄激素受体等Ⅰ型核受体。而部分核受体介导的效应是通过异源二聚体实现的，现有的重组核受体基因酵母测试方法均不能有效检测异源二聚体介导的内分泌干扰效应。本研究利用酵母三杂交技术、同源重组等分子生物学手段，构建能够检测Ⅱ型核受体的同源或异源二聚体形成相互作用的环境内分泌干扰物的检测新技术;并利用所开发的技术，探索在体外条件下典型环境内分泌干扰物作用机理，以及异源二聚体所发挥的作用。 另外，一个优秀的酵母体外检测体系，除了需要具有最基本的信号识别、传导、报告等要素，还需要满足高通量快速检测的目标。本研究针对目前广泛使用的LacZ基因表达检测耗时、费力的局限性，并绕开了GFP灵敏度不高的局限，Luc作为报告基因，试图通过同源重组的方法对已有的酵母测试体系进行改良，从而简化测试流程，缩短操作时间。使得整个测试过程更能适应高通量快速的要求。 研究结果如下: 1.应用酵母三杂交技术构建可同时表达两种核受体(RXR/TR)的三元检测体系，考察典型内分泌干扰物与Ⅱ型核受体的相互作用，进一步探索分析化合物内分泌干扰效应产生的可能机制。得到以下三条主要结论: a)T3暴露下，RXR的存在不能促进TR与GRIP1的结合; b)在没有共抑制因子存在的条件下RXR和TR不能结合， c)9-cis-RA过量时，RXR不与TR结合。 2.通过同源重组等分子生物学手段构建重组荧光酵母及其功能验证。酵母基因型为:MATα, ura3-5, ade2-101 trp1-901, leu2-3,112, gal4Δ,met-,gal80Δ，URA::GAL1UAS-GAL1TATA-Luc。该重组酵母以酵母菌株Y187为骨架，Luc基因被整合到酵母染色体中GAL1UAS-GAL1TATA下游受其调控。与Y187相同，该酵母的GAL4基因和GAL80基因(Gal80是Gal4的负调控因子)被缺失，从而排除了细胞内源调控因子的影响。与Y187不同，该酵母具有组氨酸(HIS)合成能力。该酵母基于GAL4系统，目前所有已知的该系统质粒均可根据需要在该宿主内复制或表达。 3.建立了三种重组核受体(ER、TR、RXR)荧光酵母菌株，优化了检测手段、暴露时间、底物浓度等关键技术参数。构建成功的荧光检测体系具有低成本、便捷、高效的特点。可满足快速高通量检测的要求，为建立全面的快速体外重组内分泌干扰物平台和研究内分泌干扰物核受体作用机制提供了实践基础。