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中华倒刺鲃(Spinibarbus sinensis)隶属于鲤形目(Cypriniformes)、鲤科(Cyprinidae)、鲃亚科(Barbinae)、倒刺鲃属(Spinibarbus),探求一种适合标记放流鱼类的方法是对其进行跟踪监测以及评估人工增殖放流效果的重要前提,目前应用于仔稚鱼标记效果最理想的是化学荧光物质标记,在国内相关研究中,大多数仅关注其浓度的选择,浸泡时间一般都规定在24 h,并且仅关注染色效果与浓度的关系,很少关注荧光物质浸泡对标记鱼类是否造成损伤及损伤程度,荧光物质对不同发育阶段的标记鱼类毒性大小等问题。本研究以人工繁殖的中华倒刺鲃幼鱼作为实验材料,采用静态毒理试验方法研究茜素红S对中华倒刺鲃幼鱼毒性,并连续监测浸泡24 h后,以及转入清水暂养5 d,10 d后其不同组织抗氧化酶系统以及血液生化指标的变化,初步评价茜素红S对中华倒刺鲃幼鱼毒性强弱,说明其对放流鱼类的安全性;同时探究茜素红S对鱼体产生的氧化应激反应,了解其对幼鱼生理生化的影响,最终结合耳石,鳞片的荧光染色效果找出最适合中华倒刺鲃幼鱼的染色浓度。目的在于探寻对中华倒刺鲃幼鱼安全而有效的化学标记方法,为后续探求中华倒刺鲃幼鱼的人工增殖放流标记方法提供科学参考。本研究主要的主要结果如下:1、茜素红S染液对中华倒刺鲃幼鱼的LC50(24)、LC50(48)、LC50(72)、LC50(96)以及安全浓度(SC)的质量浓度分别为788.3、744.5、653.5、595.6和59.56 mg/L,说明ARS对中华倒刺鲃幼鱼的毒性为低毒性,适合其幼鱼标记放流。2、茜素红S浸泡形成的标记在荧光显微镜下呈红色,并且在绿色激发光下观察效果最佳。耳石和鳞片的标记率与标记质量随着ARS浓度升高不断升高。除100mg/L浓度组外,其他浓度组耳石标记率达到91.7%。100 mg/L,200 mg/L浓度组中的标记效果不理想;而≥300 mg/L浓度组星耳石和微耳石标记质量良好(n≥2)的百分比分别超过95.9%和84.5%,标记效果理想。同时观察鳞片的染色效果发现:各个浓度组的标记效果均不理想。星耳石染色效果质量(n≥2)优于微耳石,耳石染色效果优于鳞片。3、血液生化指标的研究表明:茜素红S浸泡24 h后,幼鱼血浆中TP、GLB、CRE随着ARS浓度的升高而升高,当ARS浓度≥300 mg/L时,实验组与对照组存在极显著差异(p<0.01),ALB、ALP、GLU随着ARS浓度的升高表现为先升高后下降,分别在300 mg/L、200 mg/L、300 mg/L浓度时达到峰值;AST、ALT随着ARS浓度的升高先降低后升高,均在100 mg/L浓度组达到最小值。暂养5 d后,幼鱼血浆中TP,ALB,GLB,T-CHO,ALP,CRE的变化趋势基本一致,ARS浓度≥300 mg/L时,6个指标随浓度升高而降低,并且400 mg/L,500 mg/L浓度组的数值显著低于对照组(p<0.05);只有500 mg/L浓度组GLU显著低于对照组;ALT,AST的变化一致,当ARS浓度≥300 mg/L时,转氨酶随其浓度升高不断升高,其400 mg/L,500 mg/L浓度组转氨酶显著高于对照组(p<0.05)。暂养10 d后,除500 mg/L浓度组生化指标与对照组有显著差异外(p<0.05),其它浓度组各生化指标均与对照组无显著差异。结合3次血液生化指标综合分析可得:ARS浓度≤200 mg/L时,对幼鱼比较安全;ARS浓度≥300 mg/L时,幼鱼虽不会出现死亡,但对鳃、肝脏、肾脏等组织器官会造成一定程度损伤,300 mg/L,400 mg/L浓度浸泡过后组织受到的损伤在暂养5 d后可在自身的代偿作用下得以恢复;而500mg/L浓度所造成的组织损伤经10 d暂养仍未恢复,所以对中华倒刺鲃幼鱼进行标记时其浓度不能超过400 mg/L。4、通过研究不同浓度茜素红S对其不同组织抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量的变化,评估茜素红S对中华倒刺鲃幼鱼生理生化的影响。结果表明:不同浓度茜素红S胁迫下,除脑组织GSH-Px随着茜素红S浓度的提升不断升高外,肝脏、鳃和脑组织抗氧化酶活性均表现为低浓度被诱导而高浓度受抑制的规律,与茜素红S浓度呈抛物线型剂量效应关系。肝脏,鳃,脑组织抗氧化酶活性达到最大值所对应浓度分别是300 mg/L、300 mg/L、400 mg/L。暂养5 d后,随着ARS浓度的升高,脑组织3种抗氧化酶(SOD,CAT,GSH-Px)活性依然表现为不断升高趋势;而肝脏、鳃组织抗氧化酶活性均表现为先升高后下降,并且400 mg/L浓度组抗氧化酶的活性最高,500 mg/L浓度组抗氧化酶活性最低。暂养10 d后,只有500 mg/L浓度组不同组织抗氧化酶与对照组有显著差异(p<0.05)。浸泡24 h后,除鳃部MDA含量随着茜素红S浓度升高不断升高外,脑和肝脏组织MDA含量随着茜素红S浓度的升高呈现先降低后上升趋势。暂养5 d后,脑组织MDA含量随着ARS浓度升高先下降后升高,400 mg/L浓度组MDA含量最低(p<0.05),500 mg/L浓度组含量最高(p<0.05);鳃组织MDA含量随着ARS浓度升高不断升高,≥300 mg/L浓度组MDA含量显著高于对照组(p<0.05);肝脏组织MDA含量随ARS浓度升高先降低后升高,500 mg/L浓度组MDA含量最高,显著性高于对照组(p<0.05)。暂养10 d后,仅500 mg/L浓度组鳃,肝脏组织MDA含量显著高于对照组(p<0.05)。研究表明:不同组织抗氧化酶系统对茜素红S的胁迫具有组织特异性,ARS浓度过高会对幼鱼不同组织会造成氧化损伤。鳃组织对茜素红S的胁迫敏感性最高,因此在荧光浸泡标记过程中,选择适宜茜素红S浓度染色时,应考虑鳃组织的敏感度,并保持水体氧气充足。