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目的基因治疗(gene therapy)是将人正常基因或有治疗作用的基因通过一定方式导入人体靶细胞以纠正基因的缺陷或者发挥治疗作用。放射治疗是肿瘤治疗的常规手段之一,肿瘤对辐射不敏感或对辐射产生抗拒性,已被公认为恶性肿瘤难以为放射治疗根治的主要原因之一。如何进一步提高肿瘤对放射治疗的敏感性,是人们致力解决的问题。基因治疗与放射治疗的结合治疗恶性肿瘤,可使两者的优势互补,抗肿瘤效果得以进一步的增强。增强的机理主要是射线照射后增进基因转染的效率和(或)促进基因的表达,另外基因转染后可增加肿瘤细胞对射线照射的敏感性。视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma,Rb)基因是最早克隆出来的人类肿瘤抑制基因[6],Rb基因的缺失和突变将会引起细胞无限生长和繁殖,进而导致肿瘤的发生。Rb94基因是Rb基因的一部分,在以Rb94为靶基因的抗肿瘤基因治疗研究中发现Rb94基因可以抑制多种肿瘤细胞的生长。本研究用Rb94基因转染Hela细胞,并进行γ射线照射,通过相关实验指标观察Hela细胞对辐射敏感性的变化。方法利用本实验室已成功构建与扩增好的重组腺病毒Ad-Rb94[11]转染Hela细胞,然后进行137Csγ射线照射。分别用RT-PCR法与细胞免疫荧光法检测Rb-94基因在肿瘤细胞中mRNA和蛋白水平的表达,以MTT法观察肿瘤细胞的生长曲线、流式细胞术观察Rb94基因转染联合照射对Hela细胞周期的影响和单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis,SCGE)实验观察Hela细胞DNA的损伤。结果1、RT-PCR法检测到Rb94基因在Hela细胞mRNA水平的表达与细胞免疫荧光法检测Rb94蛋白水平的表达,表明Rb-94基因转染成功。2、Ad-Rb94组、照射组和Ad-Rb94联合照射组Hela细胞的生长均受到抑制,尤其是转染后96小时存活数量最低；与LacZ组和空白对照组比较差异具有显著性(P<0.05),其中联合照射组的抑制效应最强(P<0.05),Ad-Rb94组与照射组比较无统计学差异(P>0.05)。3、Ad-lacz组和空白对照组相比,照射组、Ad-Rb94组和Ad-Rb94联合照射组停留在G2期的细胞增加,其中以联合组在G2期细胞的增加最多。结果表明Ad-Rb94转染与照射均能使肿瘤细胞停留在G2期的细胞增加,G2期的细胞对照射最为敏感,其中以Ad-Rb94联合照射使肿瘤细胞停留在G2期的细胞增加最为明显,且随着照射剂量的增加,G2期细胞增加的幅度也加大,从而更有效地促进细胞发生凋亡。4、Ad-lacz组、空白组和Ad-Rb94组均未出现肿瘤细胞DNA的损伤,照射组和联合照射组细胞照射后出现DNA损伤,随着照射剂量的增加,这两种细胞DNA损伤程度也分别相应增加,其中同一剂量下联合组损伤程度强于照射组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论Rb94基因导入能增强照射对Hela细胞的生长抑制作用,而且能使照射后停留在G2期的细胞增加,加速了细胞的凋亡；在低剂量照射时,Hela细胞存在着一定的辐射抗性,但Rb94基因的导入,能使辐射抗性转为相对敏感,促进肿瘤细胞DNA的损伤,增加了Hela细胞的辐射敏感性。