海带中总色素和褐藻黄素的提取分离及其生物活性研究

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色素与人类生活密切相关,应用越来越广泛。但近年来,随着医学毒理学和生物学实验的深入研究,发现人工合成色素在人体代谢过程中产生毒性,具有潜在的致癌及其它毒副作用,使合成色素的应用种类迅速下降,应用范围受到严格限制。与此同时,天然色素产业以工业化生产的方式重新崛起,呈现出新的强势发展势头;天然色素代替合成色素在食品、化妆品和药品中的应用已成为必然的发展趋势。目前国内对于天然色素的研究开发主要集中在陆生植物中,而对于海藻类植物所含色素应用较少。我国是海带人工养殖的大国,具有丰富的海带资源,因此本论文以海带为材料,对其所含的总色素提取方法、海带的特征色素-褐藻黄素的分离以及它们的生物活性进行了初步研究。本文采用单因素试验及正交试验的方法对海带中总色素的提取条件进行了研究,试验结果显示,采用丙酮作为浸取剂,当实验条件为:液料比为30ml/g,在常温下浸提2次,总浸提时间为2h时,具有最佳的提取效率:可得色素的平均含量为1.85 mg/g(干海带)。采用硅胶柱层析法对海带中褐藻黄素进行了分离,根据海带中所含各种色素的溶解特性,采用各种不同的有机溶剂作为流动相进行筛选,最终确定了利用两次柱层析,流动相分别选择正己烷:乙酸乙酯(1:2,v/v)、氯仿:丙酮(12:1)的分离方法,得到了理想的分离效果。利用紫外-可见光谱分析,进行了褐藻黄素的定性分析。实验证明,本方法可以得到含量较高的褐藻黄素溶液,为褐藻黄素的大规模生产提供了一定的实验依据。采用DPPH法和圆纸片法分别研究了海带总色素和褐藻黄素的抗氧化活性和抑菌活性。测定了它们对自由基的清除率和对四种细菌的抑菌效果,研究结果表明,总色素和褐藻黄素的浓度与自由基清除率成正比,当总色素浓度为0.52mg.ml-1时,清除率达到65.819%,高于陆生植物黑米色素和紫甘薯色素;当褐藻黄素浓度为0.27mg.ml-1时,自由基清除率达到19.85%,低于紫苏色素、紫甘蓝色素、黑米色素、紫甘薯色素;对大肠杆菌、绿脓杆菌、八叠球菌、金黄葡萄球菌的抑菌实验结果显示,海带总色素对金黄葡萄球菌的抑菌活性最强,抑菌圈直径为18.9mm;褐藻黄素对八叠球菌的抑菌活性相对较强,抑菌圈直径为10.2mm。相同浓度下,海带总色素的抑菌活性比褐藻黄素的抑菌活性显著,说明海带总色素中还含有比褐藻黄素抑菌性更强的其他色素。
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