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目的：1.观察胡椒碱对人胃癌细胞体外活性的影响。2.观察胡椒碱对人胃癌细胞凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制。3.观察胡椒碱对人胃癌细胞周期进程的影响,并探讨其可能的分子机制。方法：4.将人胃癌细胞系HGC-27、SGC-7901、BGC-823细胞接种培养于含10%胎牛血清的RPMI.1640培养基。加入不同浓度(0μmol/L~200μmol/L)的胡椒碱,药物作用时间为24小时、36小时和48小时,用CCK-8法检测胡椒碱对人胃癌细胞体外增殖的影响5.将人胃癌细胞系HGC-27细胞接种培养于含10%胎牛血清的RPML1640培养基。用不同浓度胡椒碱作用48小时后,Hoechst33258染色法观察胡椒碱对胃癌细胞凋亡形态学作用,并用Annexin V/PI双染法进行流式细胞仪检测,以检测胡椒碱对人胃癌细胞体外凋亡能力的影响,同时用Western blot法检测胡椒碱对人胃癌细胞凋亡蛋白酶caspase-3、抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax表达的影响。3.将人胃癌细胞系HGC-27接种于6孔板中培养,并用血清饥饿法进行细胞同步化。设定浓度的胡椒碱作用于细胞48小时后,用流式细胞仪检测胡椒碱对癌细胞周期分布的影响。同时,用Western blot法检测细胞周期蛋白Cyclin A、 Cyclin B1及细胞周期蛋白激酶抑制剂p21表达的变化。结果：1.CCK-8法分析显示,胡椒碱对人胃癌HGC-27、BGC-823和SGC-7901细胞增殖能力有明显的抑制作用,并存在药物浓度和时间依赖性；胡椒碱对HGC-27细胞24小时和48小时的ICso分别为96.73μmol/L和41.34μmol/L;胡椒碱对BGC-823细胞24小时和48小时的IC5o分别为97.01μmol/L和15.68μmol/L。胡椒碱对SGC-7901细胞24小时和48小时的IC5o分别为89.98μmol/L和19.60μmol/L。2. Annexin V/PI双标法检测结果显示,胡椒碱对HGC-27细胞有促凋亡作用。与对照组相比,150μmol/L胡椒碱作用24小时后,HGC-27细胞的凋亡指数增加至17.09%。3. Hoechst3325染色分析可见,胡椒碱组细胞内浓聚亮染的染色质及核碎片,而对照组中HGC-27细胞核内染色质均匀淡然呈淡蓝色。4. Western blot分析显示,胡椒碱组凋亡蛋白酶前体caspase-3表达减少,而活化的cleaved caspase-3表达增加,提示高浓度胡椒碱激活HGC-27细胞凋亡蛋白酶caspase-3。然而,胡椒碱对HGC-27细胞内Bcl-2和Bax的表达水平没有显著影响。5.细胞周期检测结果显示,胡椒碱可以诱导胃癌细胞HGC-27周期停滞于G2/M期,与对照组相比,50μmol/L胡椒碱使G2/M期细胞分布比例增加了15.26%(p<0.05)。6. Western blot分析显示,与对照组相比,50μmol/L胡椒碱明显下调了胃癌细胞中周期进程相关的细胞周期蛋白Cyclin A(p<0.05)、Cyclin B1(p<0.01),而对p21蛋白表达水平没有显著影响。结论：1.胡椒碱可以抑制人胃癌细胞体外增殖活性。2.胡椒碱能激活HGC-27细胞内caspase-3活性,促进胃癌HGC-27的体外凋亡。3.胡椒碱可以阻滞胃癌HGC-27的细胞周期进程,使细胞停滞于G2/M期。该作用与其下调细胞周期蛋白Cyclin A和Cyclin B1一致。目的：1.观察胡椒碱联合顺铂对人胃癌细胞体外增殖能力的影响。2.观察胡椒碱联合顺铂对BGC-823细胞体外凋亡的诱导作用。3.观察胡椒碱联合顺铂对BGC-823细胞PI3K/Akt通路相关分子蛋白的影响。方法：1.将人胃癌细胞系HGC-27细胞接种培养于含10%胎牛血清的RPMI.1640培养基。分别加入75μM胡椒碱、5μM顺铂或75μM胡椒碱联合5μM顺铂,药物作用时间为24小时,用CCK-8法检测各给药组对人胃癌细胞体外增殖能力的影响2.将BGC-823细胞接种培养于含10%胎牛血清的RPML1640培养基。分别加入75gM胡椒碱、5μM顺铂或75μM胡椒碱联合5μM顺铂作用24小时后,用Annexin V/PI双染法进行流式细胞仪检测各组细胞的体外凋亡率。3.进一步用Western blot法检测胡椒碱单药组、顺铂单药组和胡椒碱联合顺铂组BGC-823细胞中凋亡蛋白酶caspase-3,抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax水平的影响,以及细胞内Akt蛋白及其磷酸化水平的变化。结果：1、CCK-8法分析显示,胡椒碱单药组、顺铂单药组和胡椒碱联合顺铂处理组中胃癌HGC-27细胞的体外增殖能力均受到抑制,胡椒碱联合顺铂组中胃癌细胞的增殖活性比顺铂单药组更低。2、Annexin V/PI双标记凋亡检测分析显示,单药组及联合用药组对人胃癌细胞均有促凋亡作用。与顺铂单药组相比,胡椒碱联合顺铂组中胃癌细胞的凋亡指数更高,为29.5%(p<0.05)。3、Western blot分析显示,单药组、胡椒碱联合顺铂组细胞内促凋亡蛋白Bax和活化的cleaved caspase-3表达水平增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少,以联合用药组差异最为显著(P<0.05)。4、免疫印迹分析结果显示,与对照组相比,顺铂处理组细胞内磷酸化AKT水平没有明显变化,而胡椒碱联合顺铂组细胞内磷酸化AKT水平显著下降(P<0.05),提示胡椒碱预处理下调了细胞中的p-AKT水平。结论：1、胡椒碱可以增强顺铂对人胃癌细胞体外增殖活性的抑制。2、胡椒碱增加顺铂抑制活性,可能与其上调癌细胞内促凋亡蛋白Bax和下调抗凋亡蛋白Bcl-2水平,促进胃癌细胞的凋亡增加相关。3、胡椒碱联合顺铂可以降低胃癌细胞中PI3K/Akt信号通路中Akt蛋白磷酸化水平,可能是导致细胞凋亡相关蛋白上调,从而抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的机制。