铅诱导的TBA构象开关比色传感测定铅和金属硫蛋白

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铅是严重危害人类健康的环境污染物,它能诱导金属硫蛋白(metallothioneins,MTs)的合成,MTs能反映环境铅等重金属的暴露状况而被广泛用作重金属暴露的生物标志物。因此,建立灵敏、特异的检测MTs和铅的新方法,对评估环境重金属污染和探索MTs功能具有重要意义。本论文以凝血酶适体(thrombinbinding aptamer, TBA)为分子识别元件,分别建立了双通道检测铅离子、MTs和以金纳米粒子为探针检测MTs两种新方法,建立的方法应用于实际样品分析,方法可靠,结果满意。本文第二章建立了基于TBA-Pb2+-hemin DNA酶测定铅离子和MTs的双通道方法。在一定条件下,Pb2+诱导TBA形成稳定的G-四聚体,再与氯化血红素(hemin)结合,形成辣根过氧化物模拟酶,能催化H2O2氧化2,2′-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS),生成蓝绿色自由基产物ABTS˙+,导致体系在415nm处吸光度值增加;在此基础上,调整体系铅离子浓度,致使模拟酶活性下降,加入MTs,使之与铅离子结合,从而恢复过氧化物酶活性。随着MTs浓度的增加,体系415nm处吸光度增大。据此,建立了测定铅离子和MTs的双通道检测方法。在优化实验条件下, Pb2+浓度在1.07×10-10~2.01×10-9mol·L-1范围内与体系A值具有良好线性关系,回归方程为A=0.409c(×10-9mol·L-1)+40.7, r2=0.9932,检出限为3.21×10-11mol·L-1。MTs浓度在5.60×10-8~3.70×10-7mol·L-1范围与体系A值呈线性相关,回归方程为A=0.133c(×10-7mol·L-1)+0.068, r2=0.9945;检出限为1.68×10-8mol·L-1。本文第三章建立了TBA-Pb2+-AuNPs比色检测MTs的新方法。TBA-Pb2+复合物溶液中加入MTs时,金纳米粒子聚集状态改变,使得体系颜色发生变化,从而建立了检测MTs浓度的比色传感方法。MTs浓度在2.06×10-8~6.93×10-7mol·L-1范围内与体系A值具有良好线性关系,回归方程为ΔA=0.454+0.115c(10-7mol·L-1), r2=0.9915,检出限为6.18×10-9mol·L-1。该方法简便、快速、选择性好,可以裸眼目视比色分析样品,不需要昂贵的仪器。
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