【摘 要】
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该实验以海面山蛭为材料,以其基因组DNA为模板,与通过印度山蛭cDNA序列设计的一对引物,进行聚合酶链反应,得到一条特异的约237bp的DNA片段,其大小与印度山蛭的cDNA大小接近.
【出 处】
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中山医科大学 中山大学中山医学院 中山大学
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该实验以海面山蛭为材料,以其基因组DNA为模板,与通过印度山蛭cDNA序列设计的一对引物,进行聚合酶链反应,得到一条特异的约237bp的DNA片段,其大小与印度山蛭的cDNA大小接近.将该片段在低熔点琼脂糖凝胶上电泳,切块回收,通过纯化得到的DNA和克隆载体pGEM-TEasy连接,连接产物转化感受态E.coliDH5a,蓝白菌落筛选阳性克隆,通过双酶切鉴定和PCR反应,确定真正的重组子.然后利用细菌的快速繁殖使重组质粒大量扩增,碱裂解法大量抽提质粒,以13﹪PEG8000纯化,得到符合序列测定要求的重组质粒.经测序并与印度山蛭cDNA序列比较,得到与印度山蛭cDNA序列大小一致且同源性很高的海南山蛭蛭素基因.国内国外对山蛭蛭素研究甚少,山蛭蛭素和凝血酶的作用机制,以及它在医疗上的应用价值有待于对山蛭蛭素基因的了解和大量重组山蛭蛭素的获得.作者相信,随着基因工程的发展,蛭素在临床治疗和预防各种血栓病方面将得到更广泛的重视和应用.
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