【摘 要】
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microRNA(miRNA)是一类内源性的非蛋白编码的小分子RNA,通过与目标信使RNA(mRNA)形成RNA诱导的基因沉默复合物(RISC)调控基因表达,在多种生理学和病理学过程中发挥重大作用。
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microRNA(miRNA)是一类内源性的非蛋白编码的小分子RNA,通过与目标信使RNA(mRNA)形成RNA诱导的基因沉默复合物(RISC)调控基因表达,在多种生理学和病理学过程中发挥重大作用。最近的一些研究工作也表明miRNA的表达水平能够反映出宗族的发展以及癌症所处的发展阶段,是很好的癌症早期诊断的标志物。因此miRNA的检测对miRNA的生物功能的研究及临床诊断具有重要意义。本论文以miRNA引发环诱导等温放大反应(LAMP),利用实时定量检测器,建立了一种简单、快速、特异性好的检测miRNA的方法。该方法检测miRNA的灵敏度达到1.0 amol,线性范围跨越6个数量级。miRNA序列短,同源序列间相似度高,在细胞内的表达水平低,很难区分,利用我们建立的方法能够实现单碱基差异的miRNA检测。另外,我们将该方法用于实际样品的检测,测得10 ng人肺部总RNA样品中let-7a的含量为50 amol。该方法只使用一种酶,不需要任何修饰的DNA探针,利用普通的SYBR Green ?荧光染料,一步即可完成miRNA的检测,操作简单,费用低,所以该方法在microRNA分析中具有很好的应用前景。
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