【摘 要】
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牛瑟氏泰勒虫病是由泰勒科、泰勒属的瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti)寄生于牛红细胞和淋巴细胞而引起的一种血液原虫病。近些年,瑟氏泰勒虫病的发生呈上升趋势,给相关国家的
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牛瑟氏泰勒虫病是由泰勒科、泰勒属的瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti)寄生于牛红细胞和淋巴细胞而引起的一种血液原虫病。近些年,瑟氏泰勒虫病的发生呈上升趋势,给相关国家的畜牧业带来了较大的经济损失,引起了国内外兽医界的广泛关注。由于经贸活动的频繁和养牛业的规模化,该病的流行区逐渐扩大,特别是该病对外地引进牛、纯种牛和改良杂种牛的危害大,已成为严重影响养牛业的疾病之一。据报道T.sergenti梨浆虫表面蛋白P23表达于瑟氏泰勒虫裂殖子膜表面,P33主要表面蛋白基因序列中的C末端有疏水的膜固着点,N末端有信号肽序列,并且都具有很好的免疫原性。本研究根据GenBank牛瑟氏泰勒虫P33和P23表面蛋白基因序列,分别设计了两对特异性引物,利用全血基因组DNA提取试剂盒提取了牛瑟氏泰勒虫基因组DNA,克隆出了大小为849bp的P33部分基因片段和669 bp的P23部分基因片段,一同连入真核表达载体pVAX1上,两个片段之间用Linker序列连接,经过酶切和PCR鉴定,结果成功地构建了含有目的基因片段的核酸疫苗重组表达质粒pVAX1-P33-P23。通过Hela细胞转染和G418筛选方法,SDS-PAGE鉴定结果为表达出约55 kDa的P33-P23融合蛋白。Westernblotting检测结果表明,该融合蛋白可被牛瑟氏泰勒虫阳性血清识别,并具有较好的反应原性,为下一步核酸疫苗的研究奠定了坚实的基础。
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