【摘 要】
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目的：研究miR-200家族在莱菔硫烷(sulforaphane，SFN)抑制膀胱癌上皮-间质转化(EMT)中的作用机制。 方法：以体外培养的人膀胱癌细胞系T24为研究模型，采用0、2.5、5、10μmol/L
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目的：研究miR-200家族在莱菔硫烷(sulforaphane，SFN)抑制膀胱癌上皮-间质转化(EMT)中的作用机制。 方法：以体外培养的人膀胱癌细胞系T24为研究模型，采用0、2.5、5、10μmol/L的莱菔硫烷对其进行处理。通过免疫蛋白印迹法(Western Blot)检测莱菔硫烷对T24细胞上皮-间质转化(EMT)标志物E-钙粘蛋白和波形蛋白、转录抑制因子ZEB1(Zinc finger E-box-binding homeobox1)的影响，采用实时定量PCR(Real-Time PCR)法检测莱菔硫烷对T24细胞miR-200家族的影响，采用RT-PCR技术检测莱菔硫烷对E-钙粘蛋白、波形蛋白和ZEB1 mRNA表达影响。采用转染miRNA模拟物(mimic)、miRNA抑制剂(inhibitor)和小分子干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)研究莱菔硫烷在抑制上皮-间质转化过程中miR-200与转录抑制因子之间的相互关系，并运用RT-PCR技术和侵袭实验(Transwell)检测细胞沉默和过表达基因的效果，研究莱菔硫烷对肿瘤上皮-间质转化的影响及miRNA、转录抑制因子在肿瘤转移中的相互作用。 结果：莱菔硫烷(2.5-10μmol/L)能促进E.钙粘蛋白mRNA及蛋白的表达，抑制波形蛋白mRNA及蛋白的表达，降低ZEB1 mRNA及蛋白的表达，并呈剂量-效应关系。莱菔硫烷作用T24细胞后可明显促进miR-200家族各成员的表达，miR-200c变化最为敏感。SFN预处理细胞后转染miRNA模拟物(mimic)，ZEB1的表达量持续降低，转染miRNA抑制剂(inhibitor)后ZEB1表达量显著增加，E-cadherin表达减少，细胞侵袭力增强。转染ZEB1 siRNA后，miR-200c有少量降低，而细胞侵袭力明显减弱。 结论：莱菔硫烷通过调节miR-200c及其靶基因转录抑制因子ZEB1的表达，最终抑制肿瘤转移EMT过程。
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