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目的:实验部分以体外培养的输卵管妊娠滋养细胞为载体,基于粘附斑激酶为中心的细胞外基质-整合素-细胞骨架跨膜信号系统,探讨化瘀消癥复方对输卵管妊娠滋养细胞侵袭与迁移能力的影响,并探讨其对该信号系统的调控机制及作用靶点,以进一步完善化瘀消癥法治疗输卵管妊娠的机理研究。临床部分通过前瞻性随机对照试验,从雌孕激素水平及子宫内膜厚度、子宫血流动力学等超声学指标切入,评价化瘀消癥颗粒对异位妊娠治愈后血瘀证患者的子宫内膜容受性的影响,从而为异位妊娠治愈后患者再生育能力的改善提供中医药治疗新思路。方法:实验部分:(1)人源输卵管妊娠绒毛滋养层细胞的体外培养与鉴定;(2)含药培养基与输卵管妊娠滋养细胞共培养,并分为空白组、Y15组、Y15+中药中剂量组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、MTX组;(3)应用Transwell法检测各组药物对输卵管妊娠滋养细胞体外迁移与侵袭能力的影响;(4)应用Western-blot法检测各组药物对u PA及其受体、整合素、FAK及其磷酸化水平、Paxillin蛋白及其磷酸化水平的表达的影响。临床部分:采用随机、对照的方法,将纳入的60例异位妊娠治愈后血瘀证患者按试验组和对照组随机分组。试验组即化瘀消癥组,采用化瘀消癥颗粒作为干预措施,于异位妊娠治愈后的第2个月经周期开始干预,每个月经周期的第7~14天服用,开水冲服,14g,tid。对照组为空白组,不予药物干预,观察时长为异位妊娠治愈后的第2个月经周期至第4个月经周期。于异位妊娠治愈后第1个月经周期及治疗的第3个月经周期的着床窗口期(排卵后第6~10天),收集以下检验与检查指标:(1)化学发光法检测治疗前后两组血清雌二醇、孕酮水平;(2)经腹+阴道子宫附件彩超监测并计算子宫内膜容受性超声Salle评分(包括子宫内膜厚度和形态、子宫肌层回声、子宫内膜下血流、舒张期前切迹、舒张期末血流、子宫动脉搏动指数PI);(3)记录不良事件。综合评估,行疗效性与安全性评价。结果:(一)实验部分1.Transwell实验检测结果表明,(1)体外侵袭实验:(1)与空白组及Y15组比较,各组均能降低输卵管妊娠滋养细胞侵袭过膜数、提高侵袭抑制率,其中中药各剂量组均能明显抑制细胞的侵袭,且呈剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与MTX组比较,中药高剂量组输卵管妊娠滋养细胞侵袭过膜数量减少、抑制率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)体外迁移能力测定:(1)与空白组及Y15组比较,各组均能降低输卵管妊娠滋养细胞迁移过膜数、提高迁移抑制率,其中中药各剂量组均能明显抑制细胞的迁移,且呈剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与MTX组比较,中药高、中剂量组的输卵管妊娠滋养细胞迁移过膜数目减少、迁移抑制率升高,差异有统计意义(P<0.05)。2.Western Blot法检测结果表明,(1)u PA、u PA-R的表达:(1)与空白组比较,中药高剂量组、Y15组、Y15+中药中组的u PA、u PA-R表达减少(P<0.05),MTX组u PA表达增加(P<0.05)、u PA-R表达减少(P>0.05);(2)与Y15组比较,Y15+中药中组的u PA表达减少(P<0.05),中药高剂量组的u PA表达增加(P>0.05);中药高剂量组、Y15+中药中组的u PA-R表达依次减少(P<0.05)。(2)整合素的表达:(1)与空白组比较,各给药组均能下调整合素的表达水平(P<0.05),其中中药各剂量组的表达呈剂量依赖性,且均少于MTX组(P<0.05);(2)与Y15组比较,中药高剂量组、Y15+中药中组的整合素表达依次增加(P<0.05)。(3)FAK、p-FAK的表达:(1)与空白组比较:中药高、中剂量组、Y15组、Y15+中药中组的FAK、p-FAK表达减少(P<0.05),MTX组表达增加(P<0.05);(2)与Y15组比较:中药高剂量组的FAK、p-FAK表达减少(P<0.05),与Y15+中药中组表达水平相近(P<0.05)。(4)p-Paxillin的表达:(1)与空白组比较,各给药组均能下调p-Paxillin的表达水平(P<0.05),其中中药各剂量组的表达呈剂量依赖性,且均少于MTX组(P<0.05);(2)与Y15组比较,中药各剂量组的p-Paxillin表达呈剂量依赖性(P<0.05)。(二)临床部分1.基线特征分析:两组受试者的年龄、异位妊娠的辨证分期及治疗方案、治疗前雌孕激素水平、Salle评分及其细目比较差异无统计学意义(P>0.05),说明基线特征基本一致,分组均衡,具有可比性。2.疗效性分析:(1)组内比较:(1)化瘀消癥组治疗后的雌二醇及孕酮水平、Salle评分、内膜厚度比治疗前增加(P<0.05),治疗后的E2/P值、子宫动脉PI值比治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05),治疗后的多层内膜、肌层回声均匀、舒张前切迹、舒张末血流、内膜血流的例数比治疗前增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。(2)空白组治疗后的孕酮水平、Salle评分、内膜厚度比治疗前增加,差异有统计学意义(P<0.05),治疗后的雌二醇水平、E2/P值比治疗前升高,治疗后的子宫动脉PI值,多层内膜、肌层回声均匀、舒张末血流的例数比治疗前减少,舒张前切迹、内膜血流例数比治疗前增加,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)组间比较:(1)治疗后,化瘀消癥组的雌二醇水平比空白组升高,差异无统计学意义(P>0.05),化瘀消癥组的孕酮水平、Salle评分、内膜厚度比空白组增加,E2/P值、子宫动脉PI值比空白组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。化瘀消癥组的多层内膜、舒张末血流的例数比空白组多,差异有统计学意义(P<0.05),肌层回声均匀、舒张前切迹、内膜血流的例数比空白组多,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)化瘀消癥组治疗前后的雌二醇差值、孕酮差值、Salle评分差值、内膜厚度差值、子宫动脉PI值差值绝对值比空白组大,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)两组间疗效比较,化瘀消癥组优于空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。3.安全性分析:观察期间仅化瘀消癥组发生不良事件1例,为第2个治疗周期出现轻微腹泻症状,考虑与用药无关。其余病例未发现不良反应。4.随访情况:受观察周期限制,入组病例随访观察时间在1~3个月经周期不等,期间化瘀消癥组临床妊娠2例,其中宫内妊娠1例,生化妊娠1例。结论:1.化瘀消癥复方可抑制输卵管妊娠滋养细胞的侵袭与迁移,且呈剂量依赖性,20mg/m L的化瘀消癥复方达最佳量效反应。2.化瘀消癥复方可能发挥与FAK抑制剂相类似或协同效应,抑制输卵管妊娠滋养细胞的侵袭与迁移,其机制可能是通过下调与细胞外基质降解有关的u PA、u PA-R的表达,同时下调整合素、FAK、p-FAK、p-Paxillin的表达,进而抑制滋养细胞外基质-整合素-细胞骨架的粘附斑激酶跨膜信号系统,减少对输卵管着床部位的侵袭和破坏,从而达到治疗异位妊娠的目的。3.化瘀消癥颗粒可能通过提高孕酮含量、降低E2/P值、增加内膜厚度、降低子宫动脉血流阻力,改善超声Salle评分,从而改善异位妊娠治愈后的血瘀证患者的子宫内膜容受性,且安全性较好。