论文部分内容阅读
本研究使用流式细胞术估计野生球茎大麦细胞核中的DNA含量,该方法包括制备完整细胞核的水性悬浮液,其DNA使用碘化丙啶(PI)染色,使用流式细胞仪进行分析,根据其相对荧光强度不同或者DNA含量不同对细胞核进行分类。由于样品的制备与分析方便快捷,DNA流式细胞仪已经成为鉴定植物倍性,非整倍体,细胞周期分析,多重性程度评估,生殖途径和估算染色体组大小的常用方法。本实验核酸含量的估计是用碘化丙啶(PI)染色的样品的核荧光强度与外标之间的比率。使用已知四倍体野生球茎大麦品种(PI 320196)作为外标,将其的荧光值定位在400的位置,对其他未知倍性野生球茎大麦品种进行鉴定。在筛选了 8种核分离缓冲溶液后,选择了最适合野生球茎大麦流式细胞术鉴定倍性的Galbraith核分离缓冲液。在52个野生球茎大麦品种中,共鉴定出两个二倍体野生球茎大麦品种,和50个四倍体野生球茎大麦品种。又进一步分析了不同地域野生球茎大麦在渗透胁迫下,通过分析大麦在高盐胁迫下不同时间植物叶片脯氨酸含量的变化以及使用RT-PCR分析了大麦在高盐胁迫下不同时间脯氨酸相关合成(P5CS)与分解(PDH)基因的表达情况,筛选出来3个野生球茎大麦品种在面对渗透胁迫时,脯氨酸合成相关基因P5CS响应积极,脯氨酸的积累速度较快;同时未发生渗透胁迫时,这3个品种较其他品种也有较高的脯氨酸起始浓度,具有较好的渗透胁迫耐受性。