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肺纤维化的发病率和病死率逐年增高,发病机制尚未完全清楚。肺泡巨噬细胞在肺纤维化发病机制中起重要作用。以往研究已证实在肺纤维化形成过程中肺泡巨噬细胞源性泡沫细胞增多,但其在肺纤维化发病机制中的作用及机制尚不清楚。转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)是肺纤维化中研究最深、最重要的细胞因子,并被认为是迄今发现的最强的细胞外基质沉积促进剂。在多种因素导致的肺纤维化中(包括博莱霉素、环磷酰胺和射线)均发现TGF-β1,含量增高。结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)是一种富含半胱氨酸的分泌性多肽,是介导TGF-β1致纤维化作用的重要的下游介质,与皮肤、肝、肾等组织器官纤维化有着重要联系,但在肺纤维化中的作用研究不多。一氧化氮(NO)与肺纤维化的关系开始受到重视。诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)抑制剂氨基胍能显著降低肺匀浆中iNOS活性,减少NO释放,显著延缓、减轻肺泡炎。在肺内NO增多时,肺内iNOS免疫阳性细胞数量增多,肺泡巨噬细胞释放NO的能力增强。罗格列酮(rosiglitazone,RSG)是过氧化物酶体增生物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)的特异性配体。PPARγ可以调节控制脂质和糖代谢基因的核受体,其对泡沫细胞形成中的作用尚有争议。本研究用博莱霉素(Bleomycin,BLM)诱导大鼠肺纤维化,并以RSG进行干预,观察肺泡泡沫细胞比例的变化,以及肺泡泡沫细胞较肺泡巨噬细胞TGF-β1、CTGF及iNOS表达的改变,探讨泡沫细胞在肺纤维化发病机制中的作用,以及RSG的影响。1肺纤维化大鼠肺泡泡沫细胞比例的变化及RSG的影响目的:治疗剂量的RSG对肺纤维化大鼠肺泡泡沫细胞数量的影响。方法将健康雄性SD大鼠60只分14天、28天两大组。14天组4组,每组6只。①sham14组:气管滴注生理盐水(normal sodium,NS)0.1ml,次日NS(1ml/d)灌胃14天。②R14组:气管滴注NS 0.1ml,次日RSG(3mg/kg/d)灌胃14天。③B+NS14组:气管滴注BLMA5 5mg/kg,次日NS(1ml/d)灌胃14天。④B+R14组:气管滴注BLMA5 5mg/kg,次日RSG(3mg/kg/d)灌胃14天。各组于14天后取材。28天组分为6组,每组6只①Sham28组:气管滴注NS 0.1ml,次日NS(1ml/d)灌胃28天。②R28组:气管滴注NS 0.1ml,次日RSG(3mg/kg/d)灌胃28天。③B+NS28组:气管滴注BLMA5 5mg/kg,次日NS(1ml/d)灌胃28天。④B+R28组:滴注BLMA5 5mg/kg,次日RSG(3mg/kg/d)灌胃28天。⑤B+R14N14组:滴注BLMA5 5mg/kg,次日RSG(3mg/kg/d)灌胃14天,之后NS(1ml/d)灌胃14天。⑥B+N14R14组:滴注BLMA5 5mg/kg,次日14天NS(1ml/d)灌胃14天,之后RSG(3mg/kg/d)灌胃14天。各组于给药后28d取材。行支气管肺泡灌洗术观察支气管肺泡灌洗液(broncho- alveolar lavage fluid,BALF)细胞总数及油红O染色法估算BALF中泡沫细胞的比例。结果:BALF中细胞总数各RSG组与其对应Sham组相比细胞数量无明显差异(P>0.05)。一次性气管内滴注BLM后,BALF中细胞总数增加,且细胞数量在肺纤维化炎症期(滴注BLM 14天后)高于肺纤维化形成期(滴注BLM 28天后)(P<0.01);给予RSG治疗后,BALF中细胞总数除B+NS14R14组与模型组无明显差异外,其余各组均明显降低(P<0.01)。油红O阳性细胞(即泡沫细胞)百分率RSG组、模型组、治疗组与其sham组相比,油红O阳性细胞百分率均显著增高(P<0.01)。各治疗组与其对应的模型组相比,油红O阳性细胞百分率均显著增高(P<0.01)。B+NS14R14组与B+R14NS14组相比,油红O阳性细胞百分率显著降低(P<0.01)。B+NS28组与B+NS14组相比,油红O阳性细胞百分率显著降低(P<0.01)。小结:在BLM诱导大鼠肺纤维化形成过程中,BALF细胞总数增多,泡沫细胞比例增高。RSG部分抑制BLM引起的BALF细胞总数增多,且RSG增加BALF中泡沫细胞的比例,其作用在前14天更显著。2泡沫细胞和巨噬细胞TGF-β1、CTGF及iNOS表达差异及RSG的影响目的:通过TGF-β1、CTGF及iNOS在肺泡沫细胞中表达的变化,来观察RSG及泡沫细胞在肺纤维化中的作用。方法:实验分组同第一部分。以油红O及免疫组织化学双重染色法区别TGF-β1、CTGF及iNOS在泡沫细胞与巨噬细胞表达差异。结果:TGF-β1免疫组织化学结果肺纤维化的前14天表达TGF-β1细胞的数量和比例多于后14天。BALF中表达TGF-β1的泡沫细胞比例多于巨噬细胞。RSG促使巨噬细胞形成泡沫细胞使表达TGF-β1的细胞比例增加,其作用在前14天更显著,但由于RSG部分抑制BLM引起的BALF细胞总数增多,使表达TGF-β1的细胞数量减少或无明显变化。CTGF免疫组织化学结果肺纤维化的前14天表达CTGF细胞的比例低于后14天,而表达CTGF细胞的数量高于后14天。BALF中表达CTGF的泡沫细胞比例小于巨噬细胞。RSG促使巨噬细胞形成泡沫细胞且部分抑制BLM引起的BALF细胞总数增多使表达CTGF的细胞的数量和比例减少从而使表达CTGF细胞总数和比例下降,其作用在前14天更显著iNOS免疫组织化学结果肺纤维化的前14天表达iNOS细胞的比例低于后14天,而表达iNOS细胞的数量高于后14天。BALF中表达iNOS的泡沫细胞比例小于巨噬细胞。RSG促使巨噬细胞形成泡沫细胞部分抑制BLM引起的BALF细胞总数增多使表达iNOS的细胞的数量和比例减少从而使表达iNOS细胞总数和比例且前14天给药与后14天给药相比更为明显。小结:气管内一次性滴注BLM可引起BALF中细胞TGF-β1、CTGF以及iNOS表达上调。泡沫细胞表达iNOS、CTGF数量及比例低于巨噬细胞。因而巨噬细胞源性泡沫细胞的增多可能减轻肺纤维化程度。RSG通过提高BALF中泡沫细胞的数量和比例而部分抑制BLM引起的CTGF和iNOS表达上调并且通过减少BALF细胞数量,部分抑制TGF-β1、CTGF以及iNOS表达总量增加,而发挥抗纤维化作用。结论:肺纤维化中,巨噬细胞源性泡沫细胞与巨噬细胞相比,促纤维化作用减弱。RSG通过提高泡沫细胞比例及减少BALF细胞数量发挥抗纤维化作用