金属卟啉探针增强化学发光成像法应用于人血清蛋白质的研究

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本文建立了以金属卟啉(铁卟啉、钴卟啉、铜卟啉)为探针的聚丙烯酰胺凝胶电泳-化学发光成像技术检测人血清蛋白质的方法。该方法是建立在金属卟啉能够作为化学发光探针增敏鲁米诺.过氧化氢体系和能与血清蛋白质结合的理论基础之上。血清蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后与金属卟啉结合,通过捕捉金属卟啉的化学发光从而检测到与之结合的蛋白质,开辟了一条化学发光成像法检测蛋白质的新方法。采用此方法分别检测了经单向、双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后的人血清蛋白质。在与直接化学发光成像法应用于双向电泳分离血清后的结果比较,铁卟啉增强化学发光成像法能够检测到更宽范围的蛋白质,通过对这些质点进行质谱鉴定,结果表明这其中包括一些血清中的低丰度蛋白质如血红素结合蛋白、补体C4等,此外还有载脂蛋白A-1、补体C3和α1-抗胰蛋白酶等不能直接发光的蛋白质。此外,本文建立的方法比传统的考马斯亮蓝R250(CBB-R250)染色法具有更高的灵敏度,在无需昂贵的抗体和复杂的免疫测定步骤的情况下,对血红素结合蛋白的检出限达到20ng,并且大大缩短了分析时间。本文还讨论了金属卟啉增强化学发光成像法检测蛋白质的机理,为将此类探针应用于蛋白质组学研究提供了理论基础。此外,本文还将铁卟啉增强化学发光成像法应用到实际样品的分析中,成功检测到电泳后地中海贫血病人和正常人血清蛋白模型的不同之处,为将此方法应用于临床分析打下了基础。
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