【摘 要】
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目的:探讨人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）来源的外泌体对兔骨髓干细胞增殖与迁移的影响。方法:组织块贴壁法分离培养原代人脐带间充质干细胞,系统传代、换液培养。用流式细胞学鉴定第3代hUC-MSCs表面标记抗原。对hUC-MSCs进行体外成脂肪诱导培养后使用油红“O”染色、对hUC-MSCs进行体外成骨诱导培养后使用茜素红染色、对hUC-MSCs进行体外成软骨诱导培养后使用阿尔新蓝染色,完成三向
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目的:探讨人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）来源的外泌体对兔骨髓干细胞增殖与迁移的影响。方法:组织块贴壁法分离培养原代人脐带间充质干细胞,系统传代、换液培养。用流式细胞学鉴定第3代hUC-MSCs表面标记抗原。对hUC-MSCs进行体外成脂肪诱导培养后使用油红“O”染色、对hUC-MSCs进行体外成骨诱导培养后使用茜素红染色、对hUC-MSCs进行体外成软骨诱导培养后使用阿尔新蓝染色,完成三向分化特性鉴定;采用超速离心法分离提取hUC-MSCs来源外泌体,并通过透射电镜观察、外泌体浓度粒径（NTA）检测、Western Blot检测进行鉴定,使用CCK-8法测定hUC-MSCs来源的外泌体促进兔骨髓干细胞增殖的作用,使用划痕实验测定hUC-MSCs来源的外泌体促进兔骨髓干细胞迁移的作用。结果:1、组织块贴壁法分离获取的细胞倒置显微镜下观察呈干细胞样贴壁生长,为细长梭形。经流式细胞术鉴定CD73、CD90、CD105均阳性表达,CD34、CD45均阴性表达。体外的成脂、成骨、成软骨的诱导分化后染色结果均为阳性。超速离心法提取hUC-MSCs来源外泌体浓度粒径（NTA）检测结果示其大小范围在50-200nm之间,主要集中在115nm。Western blot结果显示hUC-MSCs外泌体表达特异性的外泌体表面蛋白CD9、CD63和TSG101。2、CCK-8法检测的实验结果实验组与空白组相比较无明显促进兔骨髓干细胞增殖作用。3、划痕实验观察人脐带间充质干细胞外泌体可显著促进兔骨髓干细胞划痕的愈合,且随着外泌体浓度增加和作用时间延长,愈合速度明显加快。结论:1、利用组织块贴壁法成功从人脐带组织中分选出hUC-MSCs,三系诱导分化染色结果阳性,分选出的hUC-MSCs具有多项分化潜能。2、通过透射电镜观察、外泌体浓度粒径（NTA）检测、Western Blot检测进行鉴定等结果可以明确超速离心法分离提取的囊泡即为hUC-MSCs外泌体。3、当前设定各浓度下的人脐带间充质干细胞外泌体对兔骨髓干细胞无明显促进增殖作用。4、人脐带间充质干细胞来源的外泌体对兔骨髓干细胞具有促进迁移的作用,并且存在剂量与时间依赖性。为hUC-MSCs外泌体在组织工程中的临床研究和应用提供一定的实验依据。
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