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目的：
(1)建立培养人皮肤成纤维细胞的紫外线损伤模型。
(2)观察淀粉样肽前体蛋白319-335肽段(APP17肽)对紫外线(UV)照射人皮肤成纤维细胞的保护作用，并探讨其可能的机制。
材料与方法：
(1)选取包皮环切术切除的健康男性包皮，用组织块法进行原代细胞培养，形成单层皮肤成纤维细胞。用人工UV光源照射培养的单层人皮肤成纤维细胞，依据MTT实验确定合适的照射剂量。
(2)全自动多肽合成仪固相法合成APP17肽，用高效液相色谱法分离纯化，纯度达95％以上。
(3)用亚致死量UV照射培养的单层人皮肤成纤维细胞，并在培养基中分别加入0μmol/L、20μmol/L、40μmol/L和80μmol/L的APP17肽保护。MTT法检测细胞活性，激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧(ROS)的产生，生化法检测总超氧化物歧化酶(SOD)的活性，real-time RT-PCR方法检测基质金属蛋白酶-1(MMP-1)mRNA和基质金属蛋白酶-1组织抑制因子(TIMP-1)mRNA的表达。
结果：
(1)成功培养原代人皮肤成纤维细胞，并建立体外培养的人皮肤成纤维细胞的紫外线损伤模型。在本实验室紫外光源的照射下，10J/cm2 UVA+60mJ/cm2UVB或更高剂量的UV照射可降低细胞活性(p＜0.05)。
(2)40μmol/L和8μmol/LL的APP17肽可增加亚致死量UV照射后细胞的活性(p＜0.05)；而20μmol/LAPP17肽无此保护作用(p＞0.05)。40μmol/L和80μmol/L的APP17肽可增加非照射细胞的活性(p＜0.05)。
(3)UV照射后细胞内ROS增加(p＜0.05)，40μmol/LAPP17肽预先孵育48h可降低UV照射后细胞中的ROS水平(p＞0.05)。
(4)UV照射可增加成纤维细胞中SOD的活性(p＜0.05)，照射后给予40μmol/LAPP17肽作用48h，可抑制UV造成的SOD活性增加(p＜0.05)。
(5)UV照射后24h，MMP-1 mRNA表达增加1.78倍(p＜0.05)，20μml/L APP17肽不能抑制UV诱导的MMP-1mRNA表达增加(p＞0.05)，40μmol/L和80μmol/LAPP17肽可抑制UV照射后MMP-1 mRNA的升高(分别为p＜0.05，p＜0.01)。UV照射和APP17肽对TIMP-1 mRNA的表达没有影响(p＞0.05)。
结论：
(1)UV照射可抑制体外培养的成纤维细胞的活性，增加细胞内ROS水平和SOD活性，并诱导MMP-1mRNA的表达。
(2)APP17肽能增加UV照射后成纤维细胞的活性，抑制UV照射后ROS和MMP-1mRNA的表达增加。APP17肽的光保护作用可能与其抑制ROS产生有关。