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背景小檗碱是一种异喹啉季生物碱(一种植物提取化合物),可以从多种中草药植物中萃取得到,如具芒小檗、黄连等,现已被应用为传统中医药。经研究发现,小檗碱具有多重药理作用,如抗氧化,抗肿瘤等,并且在治疗肥胖、阿尔兹海默症等疾病方面具有一定作用。近年来,随着科学研究的深入,小檗碱的抗肿瘤作用受到越来越多的重视。研究证实,小檗碱可以有效地抑制肝癌、骨肿瘤、食管癌等肿瘤细胞的生长,但是,小檗碱对于肾癌细胞的作用研究甚少,具有较大的研究价值。众所周知,DNA是一种长链聚合物,能够携带生物遗传信息,因此,DNA在各种生物中具有举足轻重的作用,许多肿瘤药物可以通过各种不同的作用机制促使肿瘤细胞DNA断裂,从而发挥抗肿瘤的作用。然而,当DNA断裂后,肿瘤细胞会即刻启动DNA损伤修复机制,包括同源重组修复和非同源性末端链接等。因此,阻止癌细胞的DNA损伤修复是抑制肿瘤进展的重要方式。目的探讨小檗碱(BBR)对人肾细胞癌(RCC)细胞生长、凋亡、DNA断裂以及DNA损伤修复机制的影响。方法搜集关于BBR应用于治疗不同肿瘤的相关研究,并确定BBR对于肾癌是否具有明确的抑制作用的研究方向。采用CCK-8法测定BBR在0～24μmol/L浓度梯度下对RCC细胞(A498、786-0)增殖的影响;根据CCK-8检测结果,将肾癌细胞分为对照组(Oμmol/L)、30uμmol/L组和60μmol/L组,然后应用AnnexinV-FITC/PI双染色法及流式细胞术检测BBR对RCC细胞凋亡的影响;有效浓度的BBR处理RCC细胞后,通过蛋白免疫印迹法检测细胞凋亡通路、DNA断裂和DNA损伤修复机制中相关蛋白(pro-caspase3、cleaved-caspase3、yH2A.X、Ku70)的表达情况。结果1、用BBR处理RCC细胞A498和786-0后,肿瘤细胞增殖受到显著地抑制,并呈时间及药物浓度依赖性。2、有效浓度的BBR可以明显增加A498和786-0细胞的凋亡率。3、蛋白免疫印迹法证实,BBR可以促进A498和786-0细胞的凋亡。另外,BBR具有促进癌细胞DNA断裂的作用,并且,能够通过抑制Ku70蛋白的表达,明显地破坏A498和786-0细胞的DNA损伤修复机制,从而达到抑制RCC细胞进展的目的。实验结果表明,30、60μmol/L组与Oμmol/L组相比,cleaved-caspase3的表达水平均明显增加,γH2A.X的表达水平均增加,而Ku70表达水平则均下降;60 较 30μmol/L 组 cleaved-caspase3 表达增加,yH2A.X 表达增加,而 Ku70表达水平显著下调。结论BBR可以遏制人RCC细胞的增殖,诱导RCC细胞的凋亡,并且能够促使A498和786-0细胞的DNA发生断裂,以及有效地抑制肾癌细胞的DNA损伤修复机制。